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[转载]总黄烷醇含量检测试剂盒说明书 (货号:NM-W-0262 微量法100T/96S)

已有 93 次阅读 2024-8-14 16:35 |系统分类:科研笔记|文章来源:转载

一、产品简介:

黄烷醇(Flavanols)是一种天然植物化合物,存在于葡萄可可、茶、红酒、果蔬中,可可,葡萄猕猴桃中的黄烷醇倍认为是重要的营养品质之一  实验采用DMACA-显色法测定总含量,即在DMACA与黄烷醇类化合物形成在 640nm 处有特征吸收峰的物质,测定反应产物在 640nm 处的吸光值,即可计算样品中总黄烷醇含量。

二、试剂盒组分与配制:

试剂名称

规格

保存要求

备注

提取液

液体100mL×1

4℃保存

试剂

液体17mL×1

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃避光保存

临用前加入2mL蒸馏水,充分溶解(即1mg/mL标准品母液

三、需自备的仪器和用品:

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、蒸馏水。

四、操作步骤

建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!

1、预实验样本制备:

组织样本:称取约0.1g新鲜样本或者称取约0.01g烘干样本,加入1.0mL 提取液(若鲜样需研磨均质),置于60℃振荡提取2h12000rpm25℃离心10min,取上清待测

液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测

2标准溶液的配制:1mg/mL标准品母液用蒸馏水稀释成0.050.0250.01250.006250.0031250.0015625 mg/mL的标准溶液备用。

编号

稀释前浓度(mg/mL

稀释液体积(μL

标准液体积(μL

稀释后浓度

mg/mL

S1

1

950

50

0.05

S2

0.05

500

500

0.025

S3

0.025

500

500

0.0125

S4

0.0125

500

500

0.00625

S5

0.00625

500

500

0.003125

S6

0.003125

500

500

0.0015625

3、预实验上机操作:

酶标仪预热30min,调节波长至640nm

操作表

试剂名称(µL

测定管

标准管

空白管

样本

50

-

-

提取液

-

-

50

标准品

-

50

-

试剂一

150

150

150

混匀25℃静置10min测定640nm处吸光值A,分别记为A测定A标准、A空白计算ΔA测定=A测定-A空白ΔA标准=A标准-A空白。(注:空白管只需测定1-2

4、正式实验:

 预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围:高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定并将改变后的DW代入公式计算;

 确定好最适实验条件后,正式实验样本制备同预实验样本制备;

正式实验按照预实验上机操作步骤进行(标准管和空白管预实验已做,正式实验可选做)。

五、结果计算:

1、以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定带入方程得到xmg/mL)。

2按照样品质量算

黄烷醇含量(mg/g 质量 )= x×V1÷W×V1÷V×D= x÷W×D

3按照液体体积算

黄烷醇含量(mg/mL)=x×D

 

V1样品上样量0.05mL;                   V提取液体积,1mL;                           

D稀释倍数,未稀释即为1                 W样品质量,g

 



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