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1、新款端粒长度检测试剂盒组分
答:新款端粒长度检测试剂盒操作说明书。先解释下主要有三个说明书:
1. DNA纯化试剂盒说明书:用在DNA抽提好后,需要对DNA进行纯化;
2. 标准品和校正品说明书:标准品用来建标准曲线,校正品用来计算校正系数;
3. 端粒长度试剂盒: 用来进行实验。(里面也包含了标准品和校正品所需要的反应数)
我们试剂盒是50人份的一盒,一个人份是要做三重复的,也就是50人份的是150个反应。
2、绝对定量的话还需要纯化吗?
答:做其他的qPCR实验一般都不用DNA纯化,但是端粒长度不一样,它是怎么做都会出一个数值,但不一定准确,为了保证结果的准确性,我们摸索出了DNA纯化的方法,步骤也相对简单.我们结果的呈现可以有两种形式,一种是T/S(相对定量),一种是绝对定量(有具体的数值)。分别是采取△△CT和标曲法计算的。
3、不纯化的话,能保证浓度>50ul,纯度在 1.8-2.0 之间,这样可以吗?
答:不可以,我们需要先保证浓度>50ul和纯度在 1.8-2.0 之间,再去进行纯化DNA;还是先纯化DNA,再保证浓度>50ul和纯度在 1.8-2.0 之间。
4、仪器ABI7500可以做端粒长度检测吗
答:ABI7500和宏石都可以的,天隆机器不能做端粒长度。
5、实验过程需要全程在冰上操作,这个可以用冰袋代替嘛
答:实验过程需要全程在冰上操作,可以用冰袋代替。
6、说明书上的意思是可以用别的提取试剂提取 然后再用你们的纯化试剂纯化,我们现在有的提取试剂是达安的磁珠法提取,是否可以?
答:这个应该也是可以的,后面都需要纯化下。
7、推荐磁力架
答:200ul的磁力架 ,然后一个架子,可以处理96个样本。
8、80%的乙醇TE洗脱液 和rnase free water 是试剂盒自带吗
答:不是的,以上两种试剂需要贵司自备。
9、为什么端粒扩增曲线出现“弯折”现象只在样本中出现?标准品的端粒曲线都挺正常的(如下图):
答:还是样本抽提的问题,多纯化一遍看看因为提取原因,导致样本dna和引物结合力有问题因为样本和标准品的区别主要是抽提方式不同,标准品就是用的国产一家公司的机器抽提,我们把配套的洗脱液替换成了TE。
10、请问 校正品和标准品Nanodrop One纯化测出的浓度一般是多少
答:10-20ug左右。
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