一、产品简介：

蔗糖磷酸合成酶（EC 2.4.1.14）的发现、结构及分布在1955 年 首次在小麦胚芽中检测到，随研究材料范围扩大和深入，发现光合组织（主要是叶片）和非光合组织(果实、贮藏块根、块茎等)中都广泛存在着 SPS。蔗糖磷酸合成酶参与植物的生长发育，是植物体内催化蔗糖合成的关键酶之一。  蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸与间苯二酚反应生成有色物质，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、冰、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

组织样本：称取约0.1g组织，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

2、标准溶液的配制：把10mg/mL标准品母液用蒸馏水稀释成4、3、2、1、0.5、0.25 mg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的D和W代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。

2、按照蛋白浓度计算：

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位(U)。

SPS活性(U/mg prot)=x×V1×10³÷(V1×Cpr) ÷T =100×x÷Cpr

3、按照样本质量计算：

单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位(U)。

SPS活性(U/g质量)=x×V1×10³÷(W×V1÷V) ÷T=100×x÷W

V：加入提取液体积，1 mL；          V1：加入样本体积，0.01 mL；

T：反应时间，10 min；               W：样本质量，g；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。