一、产品简介：

绿原酸是一种有机化合物，化学式为C₁₆H₁₈O₉，是金银花的主要抗菌、抗病毒有效药理成分之一。绿原酸具有较广泛的抗菌作用，但在体内能被蛋白质灭活。与咖啡酸相似，口服或腹腔注射时，可提高大鼠的中枢兴奋性。对人有致敏作用，吸入含有本品的植物尘埃后，可发生气喘、皮炎等。

本试剂盒将绿原酸溶于适量醇溶液配制分析试液的方法，确定绿原酸试样在328nm有最大吸收峰，且试液浓度与吸光度之间具有良好的线性关系。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔UV板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、30-50目筛、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛后，称取0.01g，加入1.5mL提取液，85℃水浴提取4h，提取过程中提取液有损失，最后可用提取液定容至1.5mL，12000rpm，25℃离心10min，取上清待测。

2、标准溶液的配制：把2mg/mL（=2000μg/mL）标准品母液用提取液稀释成40、20、10、5、2.5、1.25μg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至328nm。

② 操作表：、

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μg/mL）。

2、绿原酸含量(μg/g 质量)=x×V÷W×D=1.5×x÷W×D

V：加入提取液体积，1.5mL；            W：样品质量，g。                   

D：稀释倍数，未稀释即为1。