一、产品简介：

叶绿体中所含色素主要有两大类，叶绿素(包括叶绿素 a 和叶绿素 b)和类胡萝卜素(包

括胡萝卜素和叶黄素)，它们与类囊体膜上的蛋白质结合，成为色素蛋白复合体，其含量多少及其组成决定了植物对不同光的吸收、利用效率，常常作为研究光合生理的重要指标。

根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，在 649nm 和 665nm 处测定叶绿素提取物的吸光值，在 470nm 处测定类胡萝卜素；然后利用经验公式计算出样品中叶绿素 a 含量、叶绿素 b 含量、叶绿素总含量及类胡萝卜素含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、锡箔纸、无水乙醇、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

①取新鲜植物叶片（去掉中脉）或其它绿色组织，用蒸馏水洗干净，然后吸干表面水分，称取约0.1g，剪碎放入研钵或匀浆器中。

②加入1mL提取液，少量试剂一（约50mg），务必在黑暗或弱光条件下充分研磨（难磨叶片可以添加少量石英砂助磨），然后转移至10mL离心管或玻璃试管中。

③用提取液冲洗研钵，将所有冲洗液及研钵中所有的绿色物质转入10mL离心管中，用提取液补充至10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h，观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至其完全变白。

2、预实验上机操作：

① 酶标仪预热 30min 以上，调节多波长至 470nm、649nm 和 665nm。

② 操作表： 

3、正式实验：

① 当测定吸光值超过1.0时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数D；若测定吸光值小于 0.05 时，可适当减少提取过程中提取液的用量后再进行测定，计算时相应调整（按实际提取后总体积调整计算公式中 V）；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行。

五、结果计算：

Ca（mg/L）=27.9×ΔA665-13.76×ΔA649

Cb（mg/L）=49.92×ΔA649-14.64×ΔA665

类胡萝卜素浓度：Cc（mg/L）=（1000×ΔA470÷0.5-2.05×Ca-114.8×Cb）÷245

=8.163×ΔA470-0.0084×Ca-0.469×Cb

叶绿素总含量（mg/g 质量）=（Ca+Cb）×V×F÷W=0.01×（Ca+Cb）×F÷W

类胡萝卜素含量（mg/g 质量）=Cc×V×F÷W =0.01×Cc×F÷W

V：提取液体积，0.01L；           D：稀释倍数，未稀释即为1；

W：样本质量，g。

注意事项：

1、为了避免色素见光分解，操作时应尽量避光，研磨或匀浆时应尽量缩短时间；

2、提取液易挥发，操作时做好防护措施。