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1. 以端粒为模板的PCR产物
图一:样本DNA扩增产物毛细管电泳图 图二:PCR阴性,二聚体等非特异产物毛细管电泳图
结论1: 由于以(TTAGGG)n重复序列为模板,PCR产物大小不一(间隔6碱基),长度从80碱基到400碱基左右。
结论2:二聚体不可避免。
实验中的提示1: 产物组成复杂,会有不稳定性 。每次检测需要有对照品, 另外体系和反应条件要尽量稳定。
实验中的提示2:样本端粒Ct值应该与阴性Ct值保持一定差异, 避免引物二聚体的影响。
2. 精确检测端粒长度 ,标准曲线必须做
结论1: 由于实验的误差, 有时标准品的端粒或内参扩增会出现波动
结论2:端粒扩增的效率和内参扩增的效率会有差异(斜率不一致)
结论3: 不能简单利用2ΔΔct的方案计算T/S (检测样本/标准品)
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GMT+8, 2024-10-19 22:42
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