为了进一步检查 TMEM16F 对铁死亡的潜在作用，使用 Cx3cr1-Cre 小鼠在巨噬细胞中产生 TMEM16F 敲除。巨噬细胞以相对较高的水平表达 TMEM16F，这对巨噬细胞的基本功能有显着影响，如前面在常规 TMEM16F 敲除巨噬细胞中所示。通过 RSL3 和erastin 在孤立的腹膜巨噬细胞中诱导铁死亡细胞死亡。通过碘化丙啶 (PI) 染色检测细胞死亡。敲除 TMEM16F 大大减少了巨噬细胞的铁死亡。此外，ferrostatin-1 和不同的 TMEM16F 抑制剂，如氯硝柳胺、苯溴马隆或 CaCCinhAO1 强烈抑制铁死亡。在膜片钳实验中，全细胞电流被 WT 巨噬细胞中的 RSL3/erastin 激活，在 KO 巨噬细胞中不存在。细胞内 Ca2+ 浓度的测量表明，在 ferroptosis 期间，基础细胞内 Ca2+ 水平急剧增加，这解释了 TMEM16F 电流在 WT 巨噬细胞中的自发活性。此外，在 RSL3/erastin 后，细胞内内质网 Ca2+ 储存的 Ca2+ 释放增加。

与巨噬细胞类似，Jurkat T 淋巴细胞也表达 TMEM16F，它可以通过使用 Ca2+ 离子载体离子霉素 (Iono) 或通过脂质过氧化叔丁基过氧化氢 (tBHP) 增加细胞内 Ca2+ 来激活。 TMEM16F 电流的激活被 siRNA 敲低 TMEM16F 表达 (siTMEM16F) 抑制。此外，由 ferrostatin-1 和 TMEM16F 抑制剂单宁酸显着阻断了由 RSL3/erastin 诱导的明显的铁死亡细胞死亡。这些结果证明了内源性 TMEM16F 对铁死亡的重要贡献。