小 M 不怕纯化“难”，IP、WB 只等闲。泡了两年实验室的小 M，理论与实操经验共有，且看我如何闯过蛋白纯化的几道“关”。

小 M 敲黑板：此关最基础也最重要，谨防“一步错，步步错”。

亲和层析作为经典、高效的纯化方法，利用目的分子与填料配基之间特异且可逆的相互作用，可以从细胞裂解液或其他生物样品中，一步纯化得到较高纯度目的分子。选择一款合适的亲和纯化琼脂糖，可以高效、便捷、可靠地从生物样品中分离蛋白、抗体。如何选择才叫“合适”？且听我慢慢道来：

抗体 (Antibody)，又名免疫球蛋白 (Immunoglobulin，Ig)，是一种由 B 细胞产生的大型 Y 形糖蛋白。抗体以一个或多个 Y 形单体存在，每个 Y 形单体由 4 条多肽链组成：两条相同的重链 (Heavy Chain) 和两条相同的轻链 (Light Chain) (图 1)。

抗体重链 Fc 区域的特异性序列决定了 Ig 的类型，如 α-IgA、δ-IgD、ε-IgE、γ-IgG、μ-IgM。轻链则有两种类型，分别为 λ 型和 κ 型。

图 1. 抗体结构

■ 抗体——配体要相配！

图 2. 人源抗体与 Protein A、Protein G、Protein L 结合能力对照表

■ 离心法，适合通过 IP 捕获蛋白或研究蛋白-蛋白间相互作用。精细化操作，稳！

图 4. Anti-Flag Affinity Gel 的使用步骤

PS：设置 Input 对照，确定目的蛋白已表达；保留上样后的流出液/离心后上清液，确定样本已结合。每步操作“留一手”，全面复盘 (分析实验失败原因) 有帮助。

这里来抄个作业，3、2、1，上链接我就不信这个邪！打破 Western Blot 玄学操作。

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