裂谷热病毒：一群来自现代智人故乡的幽灵（三）

四、实验室诊断

一些其它种类的病毒或细菌感染人和动物，也能产生与RVF相似的症状，因此临床上一般很难确诊。

在非洲的热带地区，一般情况下，RVF流行前都有罕见暴雨和洪水，伴随着大量蚊虫滋生，如果反刍类家畜突发大规模流产和幼畜死亡现象，就可以高度怀疑RVF的暴发流行。

但确诊还需要实验室诊断，目前已经发展出多种较为完善的实验室诊断方法，这些方法各有优缺点，应用时应该根据具体情况，采取综合互补的诊断策略，这样就能在疾病发生的不同时期都能够做出准确的诊断。

（一）病毒分离

急性发热期的血清或全血，新鲜动物尸体或流产胎儿的肝、脾、脑等都可以作为分离病毒的标本。可以用传代细胞Vero、BHK-21和C6/36等进行分离，也可以用幼鼠、成年小鼠或仓鼠等试验动物进行分离。

病毒分离培养有较高的生物安全要求，需要在生物安全3级实验室（BSL-3）内开展。

病毒分离是RVF感染诊断的金标准，但所需时间长，对试验实施和人员素质要求较高，不适合快速诊断要求。

（二）抗原检测

人和动物感染都会产生高滴度的病毒血症，但持续的时间较短，因此抗原检测的窗口期较短。

抗原检测的方法主要包括琼脂凝胶免疫扩散试验、免疫荧光试验和ELISA等。特别是改进的夹心ELISA 法，用重组N蛋白包被，检测血清中N蛋白，该方法特异性高，操作简便安全。

（三）抗体检测

感染RVFV的人和动物在病毒血症消失后不久就有抗体产生。一般情况下，患者发病5d后出现IgM抗体，可持续2-3个月。通过检测双份血清阳转和4倍或4倍以上抗体增长，或者检测IgM，都可以作为近期感染的实验室依据。

常用的检测抗体的血清学方法主要有中和试验、ELISA、血凝抑制试验和补体固定试验等。这些血清学方法在流行病学调查中也有广泛应用。

中和试验是国际贸易中规定的抗体检测的金标准，包括微量中和试验、蚀斑减少中和试验和小鼠中和试验。中和试验有很高的特异性和敏感性，但操作需要活病毒，对实验室的生物安全要求高，非疫区国家和地区不推荐使用。

传统的ELISA试验所需的抗原是灭活的病毒培养物，可以特异性的检测IgM、IgG和总抗体，由于使用的是灭活抗原，因此可以在RVFV不流行的地区使用，成为疾病监测、进出口兽医签证和疫苗效果评价的常用方法。

（四）核酸检测

基于核酸的分子诊断技术具有快速、敏感、特异等优点，可以用于出现病毒血症的早期诊断。由于病毒血症时间短，应用核酸分子检测技术时需要与血清学方法结合使用。

目前运用普遍的是实时荧光定量PCR技术，理论上5-10个RNA拷贝即可检出。

此外，对临床标本中或分离病毒的基因片段进行测序分析，可以进一步了解病毒的某些分子遗传特性，为病毒溯源提供重要的分子流行病学依据。