|||
常用DNA分子标记类型和特点
依据对DNA多态性的检测手段,DNA标记可分为四大类:
第一类为基于DNA.DNA杂交的DNA标记。主要有限制性片段长度多态性标记(RFLP)、可变数目串联重复序列标记(VNTR)、单链构象多态性RFLP(SSCP、RFLP)等;
第二类为基于PCR的DNA标记。主要有随机扩增多态性DNA(RAPD),简单重复序列DNA
标记(SSR),测定序列标签位点(STS),表达序列标签(EST),测序的扩增区段(SCAR);
第三类为基于PCR与限制性酶切技术结合的DNA标记。主要有两种,一种是扩增片段艮度多态性(AFLP),第二种是酶解扩增多态顺序(CAPS);
第四类为基于单核苷酸多态性的DNA标记。主要是单核苷酸酸多态性(SNP)。
各类常用分子标记的特点和应用如下:
引物设计方法 | 特点 | 应用 | 多态性原因 | |
RAPD | 以几个随机寡核苷酸(常用10个)为引物 | 简便、易行、灵敏、安全性好、 DNA用量少,能快速进行基因多态性研究,但重复性较差 | 遗传资源保存、遗传多样性研究、种质资源鉴定、遗传资源分类、品种纯度鉴定、遗传图谱的构建、突变检测、基因标记和基因组比较 | 多态性是由于引物与不同区段的同源序列结合,产生不同的DNA产物 |
RFLP | 以单拷贝或低拷贝的DNA克隆(基因组 DNA或cDNA)作探针 | 共显性、信息完整、稳定性、重复性好 | 品种鉴别和品系纯度鉴定、分子标记连锁图谱构建、基因定位、种质鉴定和遗传背景分析、遗传多样性分析 | 多态性主要足由于限制性内切酶酶切位点或位点间DNA序列中 单碱基的替换、DNA片段的插入、缺失、易位和倒位等引起 |
SSR | 两端序列较保守, SSR引物根据与微卫星重复序两端的特定短序列设计,用来扩增重复序列本身,从而揭示微卫星的多态性。 | 共显性、信息完整、稳定性重复性好,操作简单 | 生物遗传作图、基因定位、群体遗传研究、个体间亲缘关系鉴定 | 多态性是由于SSR座位的基本单元重复次数的小同而形成 |
SNP | DNA测序中碱基的峰 高和面积变化,已有DNA序列比较,设计特定区域DNA片段的PCR引物,扩增 相虑DNA片段并进行 序列比较 | SNP的数量极其丰 富,并且可以进行自动化检 | 适应于复杂性状的遗传分析、引起群体差异的基因识别 | 多态性足由于单个核苷酸的变异所引起 |
AFLP | 用两种能产生黏性末端的限制性内切酶将基因组DNA切割成分子量人小不等的限制性片段,然后将这些片段与其末端互补的已知序列的接头连接,所形成带接头的特异片段用作随后的PCR反应模版,PCR引物5’端与接头和酶切位点序列互补,3’端在酶切位点后增加1~3个选择性碱基 | 不需要预先知道 DNA序列信息的情况下就可以同时进行多数DNA酶切片段的PCR扩增,既有RFLP的可靠性又有RAPD的方便性 | 构建高密度的遗传 连锁图,DNA指纹 图谱构建 | 多态性是由于酶切位点和其后的选择性碱基的变异 |
SCAR | 根据RAPD或AFLP碱 基序列设计特异引物 | 克服了RAPD标记 的不稳定性, AFLP标记的难操作性 | 生物遗传作图、基因定位 | 多态性是由于引物与不同区段的同源序列结合,产生不同的DNA产物 |
CAPS | 适合于扩增产物的限 制性内切酶 | 是一些特异引物 PCR标记的延伸 | 适应于性状连锁标 记的发掘 | 多态性是由于特异PCR产物DNA序列内限制性晦切位点变异 |
Archiver|手机版|科学网 ( 京ICP备07017567号-12 )
GMT+8, 2024-11-1 09:28
Powered by ScienceNet.cn
Copyright © 2007- 中国科学报社