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贝塞尔平面光显微镜

已有 5732 次阅读 2013-6-16 05:34 |个人分类:评论|系统分类:科研笔记| 显微镜, 平面

超分辩率显微镜可以有超级空间分辩率,但不能长时间成像。平面照射显微镜毒性小可以长时间三维成像,但平面分辩率受制于薄光的厚度。贝齐格结合一种基于贝塞尔光束的平面照射与超分辩率的结构照明整合起来实现高速高分辩率低毒性成像。2011年时贝齐格发表了用长铅笔样的细光在限制平面光照明显微镜的激发范围。为达到各向同性的效果,他们用了两个模式:一是基于双光子激发,二是基于有特征模式的平面光的光断层扫描。然而,前者不能做多颜色成像,后者有很大的细胞毒性,两个都受衍射限制。现在结构照明技术(structured illunimation)被引入,显微镜的基本造形与前面的相似,两个物镜有相同的聚焦面并固定在正确的角度上。第一个产生贝塞尔光束,他以不连续的步子扫描产生激发的平面光栅,第二个成像产生的荧光。这个过程在连续的平面重复,整个数据重建形成三维高分辩率的样品。用结构照明显微镜不仅可以提高分辩率,也可以减小光损伤。可以对体内动态过程长时多色成像。他们可以对有高密度荧光信号的细胞或传统结构照明显微镜宽场成像表现不好的大多细胞组织成像。相对于他们前面的设计或共聚焦显微镜结构照明与贝塞尔平面可以1.5倍的扫描方向的分辩率和2倍的轴向分辩率。虽然在成像体积内三倍的分辩率提高听起来不是很了不起,但是它与低毒性和高速耦合,这就很重要了。Duiyu对于三维长时成像最弱的一维永远是决定好坏的,贝塞尔平面结构照明显微镜的优势是我们不记录任何一维的情况,但四维组合是最好的。他们可以观察整个线虫幼虫染色体有丝分裂的超分辩率成像,下一步他们要做的是贝塞尔平面光显微镜的商品化。

               

                                贝塞尔光束的产生。




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