最近按照文献总蛋白提取的办法进行组蛋白H3的WB，发现很难杂出H3大小的条带，可以杂出一条单一的非特异条带。可能是自己的技术不行，无法杂出条带来。最近发现下面这个方法终于可以杂出H3条带来。贴在这里提醒自己走的弯路。

稻瘟菌组蛋白的提取

1， 用灭过菌的刀片切取细菌块（尽可能的细）放入CM液体培养基，28度摇床，150rpm培养2天。（放入菌块不可贪多）

2， 收集菌体，利用液氮将菌丝研磨成粉。加入4 mL Lysis buffer（0.3 M sucrose, 0.04 M NaHSO3, 25 mMTris-HCl [pH 7.4], 0.01 M MgSO4, 0.5 mM EDTA, 0.5% NP-40, 1 mM PMSF, 1 μg/mlleupeptin, 1 μg/ml pepstatin），冰上摇动裂解5分钟。

3， 8000g，4度离心10分钟。去上清后再用2 mL Lysis buffer清洗一遍。

4， 用CW buffer（2 mL 0.15 M NaCl, 10 mM Tris-HCl[pH 8.0], 1 mM β-mercaptoethanol, 1 mM PMSF, 1 μg/ml leupeptin, 1 μg/mlpepstatin, mixed with 2 ml 0.4 M H2SO4）重悬菌体。4度孵育过夜。

5， 12000rpm4度离心10分钟，吸取上清质新的离心管中。在上清中加入1/4体积的100% TCA，冰上孵育1小时。

6， 12000rpm4度离心10分钟，丙酮清洗两边。

7， 最后沉降蛋白用1*SDS Loading buffer溶解蛋白。