拟南芥植物材料RNA（不含DNA污染）提取方法—包括幼苗、叶片、角果和种子等(Oñate-Sánchez and Vicente-Carbajosa, 2008)

1，用于拟南芥幼苗、叶片和花序材料RNA的提取方法：

首先配制提取液Ⅰ、提取液Ⅱ及7.5 M 醋酸铵，按照如下方法配制。

提取液Ⅰ（100 mL）：2% SDS， 68 mM 柠檬酸钠，132 mM 柠檬酸，1 mM EDTA。

提取液Ⅱ（50 mL）:4 M 氯化钠，16 mM 柠檬酸钠，32 mM柠檬酸。

1）取30~50 mg的材料，在液氮中研磨成粉，迅速转移到离心管中。

2）加入300 μL 提取液Ⅰ，充分振荡，室温静置5 min。

3）加入100 μL 提取液Ⅱ，缓慢颠倒混匀，4℃ 冰箱静置10 min。

4）加入150 μL 三氯甲烷，充分混匀，4℃，12000 rpm，10 min。

5）小心取上清，加入等体积异丙醇，颠倒混匀，4℃，12000 rpm，7 min。

6）去上清，沉淀用70% 乙醇洗一次，超净工作台吹7 min， 加入30 μL 含有DNase Ⅰ的DEPC 水溶解沉淀，37℃ 消化1 hr。

7）加入70 μL DEPC 水、50 μL 7.5 M 醋酸铵和400 μL 无水乙醇，混匀，4℃，12000 rpm，20 min。

8）RNA 沉淀用70% 乙醇洗一次，干燥RNA 并用20~50 μL DEPC 水溶解。

2，用于拟南芥角果和种子材料RNA 的提取方法：

首先是提取buffer、8 M 氯化锂和3 M 醋酸钠（pH 5.2）的配制。

提取buffer（100 mL）：0.4 M 氯化锂，0.2 M Tris，25 mM EDTA，1% SDS，pH 8.0.

1）取50 mg 角果或种子，液氮研磨至粉末状，转移到离心管中，加入550 μL 的提取buffer 和550 μL 的三氯甲烷，充分混匀，4℃，12000 rpm，5 min。

2）将上清转移到新的离心管中，加入500 μL 水饱和酚和200 μL 三氯甲烷，充分混匀，4℃，12000 rpm，5 min。

3）将上清转移到新的离心管中，加入1/3 体积的8 M 氯化锂，充分混匀，4℃ 冰箱过夜或-20 ℃静置1 hr，4℃，12000 rpm，30 min。

4）加入500 μL DEPC 水，7 μL 3 M 醋酸钠和250 μL 无水乙醇，混匀，4℃，12000 rpm，10 min沉淀多糖。

5）将上清转移到新的离心管中，加入43 μL 3 M 醋酸钠和750 μL 无水乙醇，混匀，-20℃ 冰箱放置 1 hr，4℃，12000 rpm，20 min。

6）RNA 沉淀用70% 乙醇洗一次，超净工作台干燥7 min，加入含有30 μL DNase Ⅰ的DEPC 水溶解沉淀，37 ℃消化1 hr。

7）加入70 μL DEPC 水、50 μL 7.5 M 醋酸铵和400 μL 无水乙醇，混匀，4℃，12000 rpm，20 min。

8）RNA 沉淀用70% 乙醇洗一次，干燥RNA 并用20~50 μL DEPC 水溶解。

Oñate-Sánchez, L., and Vicente-Carbajosa, J. (2008). DNA-free RNA isolation protocols for Arabidopsis thaliana, including seeds and siliques. BMC Research Notes 1, 93.