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逆转录&定量PCR

已有 8162 次阅读 2018-6-9 20:05 |个人分类:斑马鱼|系统分类:科研笔记

 RT-PCR就是逆转录 PCRreverse transcription PCR)或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。

RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行 DNA扩增。其实 Rea-ltime-PCR qPCRQuantitative Real-time-PCR )是一码事,都是实时定量PCR,指的是PCR过程中每个循环都有数据的实时记录,因此可以对起始模板数量进行精确的分析。

虽然Real-time PCR(实时荧光定量PCR)和 Reverse transcription PCR(反转录PCR)看起来都可以缩写为RT-PCR,但是,国际上的约定俗成的是:

RT-PCR特指反转录PCR

Real-time PCR一般缩写为

QPCRquantitative real-time PCR

real-time RT-PCR中间的RT”是 reverse transcription(逆转录),整个意思就是利用 mRNA RNA 为模板的实时逆转录PCR技术(quantitative Real-time RT-PCR)。

real time RT-PCR指的是 qPCR+RT-PCR的组合,是说将mRNA逆转录为cDNA后再作为模板进行实时荧光PCR分析,因为RT-PCR是可以定性的,但不能进行定量检测的。

所以不难理解 real-time RT-PCRRT-qPCR 就是结合了荧光定量技术的反转录PCR:先从 RNA 反转录得到 cDNART),然后再用 Real-time PCR进行定量分析(qPCR)。所以,实时荧光定量PCR,它不仅可以用cDNA作为模板,也可以用基因组DNA等作为模板。




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