琼脂糖凝胶电泳回收DNA绝对是个痛苦的过程，先要配胶（我忽然想到一个笑话，师妹说：“师兄，晚上帮我配个种吧。”别问我怎么想到的，因为还有个笑话：“师妹，你胶配完了吗？”），胶配完了等着凉下来，电泳，切胶……，等半天，不仅回收率低，接触各种有毒有害物品（溴化乙锭，乙醇，紫外），而且变性或者受损的DNA有可能降低克隆效率。正所谓宁可重做PCR，坚决不做胶回收，这是谁说的？我说的。

本文总结了一些技巧，帮助提高DNA的回收率和纯度。

1. 尽可能切下最少的胶

大多数人都只是切下一片方形的凝胶块，没有翻过来把胶块正面和背面的多余凝胶去掉。如果倒的胶很厚，多余部分就不容忽视了，包裹DNA的凝胶去掉的越多，产量也就越高。我一般会顺便切成6-8个小块，直接装到EP管里，坚决不用师姐教的用枪头戳的办法，简直就是打地鼠。

2.尽量减少暴露在紫外光下的时间

UV光引起的DNA损伤会影响DNA的克隆性能。应该快速完成切胶，如果一次要切好几个，暂时不切的胶不要放在紫外下，切完一个放一个。

3.除去残留的苯酚

如果不用试剂盒，使用苯酚从琼脂糖中纯化DNA，残留的苯酚无法通过乙醇沉淀去除，会抑制连接反应。上清液在65℃下加热蒸发5分钟可以从水相中除去苯酚，沉淀DNA之前要冷却10-20分钟至室温，子曰：吸附要凉，洗脱要热。

4.更换一瓶新的琼脂糖

你信吗，琼脂糖有时候也会抑制酶活，可能是琼脂糖太旧、质量不好或者某些品牌就是不好使。如果遇到诡异的情况，不妨打开一瓶新的琼脂糖。

5.做对照

如果要判断某个问题是不是凝胶回收造成的，单酶切一个空载体，跑胶回收，应该很容易连接，克隆非常多才对，如果这样还无法克隆该DNA，则可能是其它因素，例如DNA的二级结构，在大肠杆菌中产生不稳定重复序列，或者编码了有毒的蛋白。

6.复性DNA

融胶的时候盐浓度很大，伴随加热导致DNA变性。如果回收洗脱的DNA大小只有预期的一半（因为它是单链的），应该把DNA在95℃加热一分钟，并缓慢冷却至室温完成复性。

7.再洗一遍

试剂盒中的洗涤缓冲液中含有乙醇，额外的清洗步骤有助于去掉膜上的融胶液残留，否则会抑制酶的活性。

8.确保所有的乙醇已经挥发

乙醇洗涤后的二氧化硅膜必须干燥，才能保证良好的回收率和克隆的成功率。要确定DNA中最后是否含有乙醇，简单的跑一下胶，如果样品往上涌，说明有乙醇残留。为了干燥得更彻底，把盖子完全打开，我有时候直接放到烘箱里烘一会。

9.别舍不得用好乙醇

不纯的酒精，例如工业酒精，含异丙醇，甲醇甚至苯，和这些东西从二氧化硅膜上蒸发不掉，如果回收的DNA有怪味，或者在-20°C不会结冻，又或者表面有油，赶紧换个纯一些的乙醇。

10. 加热洗脱缓冲液洗脱

加热洗脱缓冲液，能从膜上洗脱更多的DNA，从而提高产量。洗脱之前把洗脱缓冲液加热至70℃。或者离心前把吸附柱放在热水中加热5分钟也可。

好了，希望大家能够体会优雅的切胶回收是怎样一种体验了。

为什么能用苯酚抽提DNA？

普通PCR真的普通吗？

基因表达，未卜先知

外显子在哪里？

看见，启动子