最近，朋友圈被韩春雨老师刷屏了，各种致敬，欢呼和反思……可是这篇文章主要研究了什么内容呢？不知道？韩老师该伤心了。本人也很关心该领域进展，看过几十篇CRISPR/Cas9的文章，使用该技术自己动手拿到了敲除小鼠，现在就简单介绍一下韩老师这篇文章。

原文链接在这里，欢迎有兴趣的同学自己阅读，（Nat Biotechnol现在影响因子40左右）文章不长，一共7页，包括4个主要结果， 5个Figure.

Nat Biotechnol. 2016 May 2. doi: 10.1038

DNA-guided genome editing using the Natrono bacterium gregoryi Argonaute.

Gao F, Shen XZ, Jiang F, Wu Y, Han C.

1N. gregoryi来源的Ago蛋白能够在DNA的指导下断裂DNA

已有报道5'磷酸化的单链DNA能够指导TtAgo和PfAgo断裂DNA，但是所需温度高于65度。作者用PSI-BLAST办法在NCBI上搜索到TtAgo和PfAgo的同源蛋白AFZ73749.1（NgAgo），纯化后能够在37度把环状DNA线性化。体系需要NgAgo，13–25 nt的正向和反向5'磷酸化的单链DNA。（图一）

2NgAgo可结合单链向导DNA，并使双链目标DNA断裂

转染293T细胞系后并未发现与NgAgo结合的DNA，说明人类细胞中5'磷酸化的单链DNA低到难以检测的水平。转染NgAgo表达载体和不同的向导DNA后发现NgAgo只能结合5'-磷酸化的单链DNA，但不能结合5'-磷酸化单链RNA，而且NgAgo与单链DNA的组装只发生在NgAgo产生后很短的时间内，一旦组装完成，其中的DNA在37 °C就不能被替换了。这种只能使用“原版”向导DNA的特性保证了NgAgo忠实地切割设计好的靶点（图二）

那么下一个问题，NgAgo在什么位置断裂DNA呢？实验结果显示NgAgo可以在ssDNA指导/目标区域1−20 nt内随机删除几个核苷酸，但作用方式和外切酶不一样。细胞转染实验证明NgAgo与Cas9-sgRNA体系效率相同，ssDNA长度为24 nt时效率最高（图三）

3NgAgo作用的目标范围广泛而错配耐受性低

NgAgo还有什么样的特点呢？作者又做了三种实验：在NgAgo蛋白上添加入核信号NLS后转染细胞，使用5个不同的ssDNA断裂目标基因DYRK1A，结果显示都可以断裂；使用42个不同的ssDNA断裂其它8个目标基因，结果一致；在多种细胞中重复了实验，也都可以断裂目标基因。（图四）

为了研究核苷酸错配对NgAgo活性的影响，作者突变了gDNA的每个碱基，单个碱基错配会导致活性下降73–100%，第8到11位突变活性下降85~100%，而任意位置的连续三个碱基突变会导致失活。这一点上NgAgo-gDNA体系要优于Cas9-sgRNA体系。

4NgAgo可以指导DNA片段精确地插入基因组中

在用同源DNA供体共转染293T细胞系后，DNA片段通过HDR修复精确地插入基因组中，同源重组后的细胞会表达GFP，流式细胞检测结果显示阳性细胞比例高达11.7%，且没有像Cas9一样造成脱靶（图5）。

好了，以上就是原文主要内容，文章还有大量附加材料。匆忙翻译，错误之处还望大家指正！欢迎转载，请保留二维码哦。

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