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如何实现光学超分辨(四)
席鹏著
第四章 RESOLFT删繁就简二月花
前面两篇中,我们讲到了利用STED进行先激发再擦除,或者利用GSD进行先擦除再激发,均可实现超分辨率显微。
它们的本质是什么?有没有别的渠道?
上图展示了STED的能级,其中,我们要做的,就是区别红箭头(受激辐射)和黄箭头(自发辐射)。既然如此,把红箭头掰到方向跟黄箭头相反,更容易区分。实验上,完全可以让粒子在激发态的时候keep going,通过Excited State Absorption (ESA)来擦除它。Hell组曾经利用ESA实现了对掺锰的量子点的超分辨。
一个箭头,扭转乾坤。
回答我们刚开始提出的问题:本质上,这一类的方法都是抑制粒子处于激发态的几率,也就是不让它在S1态,不管是在摇篮中扼杀(GSD),到达后拉下来(STED),还是将其送上西天(ESA)。
放一张总结的图,再次欣赏一下这能级上的舞蹈。
这一方法被Stefan Hell称为RESOLFT, reversible saturable/switchable optical transitions,可逆饱和/开关光跃迁。我们讲到的STED/GSD/ESA都可以统一地概括在它下面。
在下一章,我们将看到另外两种独辟蹊径的超分辨成像机理,以及它们之间的内部联系。
写到这里的时候,笔者刚好有一篇文章在Opt. Express刊出,内容是关于如何用一小片塑料或纸片,用共聚焦扫描显微就能在透明的样品(细胞、组织切片都行)实现和DIC一样震撼的位相浮雕成像的。同时,告诫大家不要将打印纸含在嘴上,有剧毒致癌物----我们实验发现,从三无小饭馆来的餐巾纸荧光极强,打印纸荧光也不弱。
链接:http://www.opticsinfobase.org/oe/abstract.cfm?uri=oe-20-13-14100
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