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基因治疗新突破--------文献导读
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作者：来自荷兰
题目：AAV-mediated in vivo knockdown of luciferase using combinatorial RNAi and U1i
简单介绍
作者第一次用两种方法来进行基因治疗：RNAi和U1i，RNAi机制比较清楚，用于基因治疗也不是什么新的概念，但是U1i并不被大多数人所知，而且且抑制pre-mRNA的机制与RNAi也不相同。作者在体内和体外做了实验，结果表明两种方法共同使用大大提高了荧光素酶消失的效率（作者用的是荧光素酶报告基因）和有可能
提高了安全性。
思想路线：本研究的创新性就在于把两种方法结合起来，共同发挥作用，并取得了良好的效果。
1 以前单独用RNAi，其机制：短的双链RNA,导入细胞，然后形成的RISC能够把mRNA降解
2 单独用siRNA用腺先关病毒为载体还存在问题，有两种解决的办法，一种是在病毒载体上下功夫，另一种就是结合其他治疗机制，作者想到了后者
3 U1是前体mRNA剪切复合体snRNA的一部分，它对于mRNA的成熟非常重要,U1 snRNA的另一个功能是能够与前体mRNA3‘末端的多聚腺嘌呤结合，最终阻碍正常mRNA的产生。
4作者在体外构建了一些列的克隆载体，包括荧光素酶载体 siRNA载体以及8个U1载体，分别分析了了单独的siRNA，结合U1等的荧光素酶消失情况，发现了两种结合效果要好
5 在小鼠体内做实验，作者利用流体动力学的方法，把构建好的shluc1或者对照载体shapob与L4/L5或者对照组H1/H2共注射的方法获得结果是，shluc1和L4/L5组的结合荧光素酶的消失效率最高
6 作者为了能够以后应用到临床，于是选择了AAV腺先关病毒为载体，在体外构建了四个相关的载体，一个是把shluc1和L4/L5构建在一起的，它们有自己的启动子，另外三个为对照的，它们和荧光素酶载体共转染细胞，结果就是组合的那一组消灭荧光素酶的效果最好
7 作者又把AAV介导的siRNA和U1在体内做实验，取得了良好的效果。
总结 ：1 作者在体内做了，又在体外做，先做简单的，在逐步深入，这是最研究的良好策略，值得学习。
2 作者选的是荧光素酶，没有应用到具体细胞内的基因如原癌基因，这是以后研究的内容。
3作者选用AAV载体，其它载体的具体效率还有待研究
4 基因治疗需要进行长时间的观察，以后会有什么情况需要进一步的跟踪研究，如脱靶现象，细胞免疫毒性等等。
4 希望先关领域的专家提出意见
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