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文献导读----micrRNA 与 肿瘤转移

已有 3845 次阅读 2011-4-6 21:03 |系统分类:科研笔记| 文章, 意大利, 研究发现

emboj2011102a.pdf

microRNA-214 contributes to melanoma tumour progression through suppression of TFAP2C发表在nature上的文章

作者:主要研究micrRNA在肿瘤转移中的作用,为意大利人

背景及结论:micrRNA在肿瘤发生中起作用,肿瘤引起死亡的很大原因在于转移,作者利用不同阶段的肿瘤细胞作为模型,研究micrRNA在肿瘤转移中的作用。研究发现,在体外micrR214可以增加细胞的活动以、接触细胞分离后的存活和从血管中溢出,在体内能够转移。这主要是通过抑制抑癌基因的表达以及抑制与细胞粘附相关细胞表面分子造成的。

思考路线:1 首先鉴定出,那种micrRNA参与了肿瘤的转移,作者首先查阅了大量的资料,发现已经研究发现miR-21, miR-10b, miR-373 and 520c, miR-126, miR-335, miR-31, miR-200, miR-151 and miR-9中起作用,以及一些与肿瘤转移相关的因子,然后为了寻找新的途径,做了第一个实验----筛选:作者找了低转移的肿瘤细胞A375和高转移的肿瘤细胞MA-1、MA-2、MC-1、MC-2中存在差异的micrRNA214

2 要做实验证明micrRNA214确实与肿瘤的转移有关:在不具有转移能力的肿瘤细胞内通过病毒载体导入micrRNA214,在具有转移能力的肿瘤细胞内注入microRNA214,同时与空载体作对比,以及通过导入micrRNA214的抑制剂 ,结果显示micrRNA214在在体外细胞中确实能够影响细胞之间的粘附

3 是不是micrRNA在体内真正具有增加转移的能力:作者又做了体内试验,分别把具有迁移能力的细胞和不具有迁移能力的肿瘤细胞注射到免疫缺陷的小鼠体内(小鼠尾部静脉),做了具有micrRNA和不具有microRNA以及抑制microRNA等相关实验,通过观察肺部肿瘤解剖情况和组织化学免疫得出结论,microRNA214确实与肿瘤细胞的迁移率有关

4 有一个疑问,是否micrRNA214是通过使得肿瘤细胞大量增殖而可能来实现转移的,作者又做了实验称了 重量和 克隆数的多少来说明 micrRNA214不具有增殖肿瘤细胞的能力

5 接下来的问题是micrRNA214是通过什么途径发挥作能的,作者利用生物信息学的方法首先筛选到,micrRNA214可能作用的基因,然后用荧光蛋白作为标记,最终筛查出ITGA3何TFAP2C报告基因表达下降,MET表达升高

6 作者在此查找文献,了解ITGA3和TFAP2C以及MET的先关研究,发现他们是与胚胎发育以及癌症发生相关的基因,参与了一系列的生命活动.TFAP2C是与黑色素瘤相关的肿瘤抑制基因,ITGA3是细胞表面的粘附受体,当抑癌基因失活,细胞之间的粘附下降的时候,肿瘤就会转移。

讨论

1 在多种转移性的重力中都发现了高表达的micrRNA214

2 microRNA214先关基因的敲出使得胚胎致死

3 micR214的靶基因有很多个

4用到一些传统的实验方法:细胞培养、构建载体、转染、设置对照、体内试验和体外实验、从正反两个方面说明、、荧光素酶报告基因的使用、生物信息学分析、分析与肿瘤细胞转移有关的现象比如:细胞粘附性、转移、增殖、迁移、侵入性的改变等等

本实验总体来说算是一种研究micrRNA的经典模式,但是缺少创新性。



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