自从去年贴出《单条植物线虫DNA微量提取》文章以来，有很多同行来电来信问我该技术方法的一些细节问题，甚至有人提出了质疑，对此我希望可以解释一下。

在我们提出的单条植物线虫DNA微量提取方法中，最关键的一点就是用分子生物学实验室常见的10x PCR缓冲液取代了以前常用的裂解缓冲液（Lysis buffer），这一点非常重要。因为这无疑免去了配制裂解缓冲液带来的麻烦，更何况自配的缓冲液与公司的正规产品在质量上不可同日而语。

其次，由于一条线虫只有1000个细胞左右，所以在提取其DNA时需要比较精巧的手法，将一条大约1mm长的细小线虫在解剖镜下用手术刀切割成2~3段并不是一件非常容易和惬意的事情，这需要细心加耐心再加熟练。

再一个就是实验室所用的试剂问题。毫无疑问，试剂的优劣在很大程度上会决定你实验的成败。在经过多次实验仍然不能成功的情况下，检查一下所用的试剂，或者重新订购一些新的高质量的产品是有必要的，尤其是DNA聚合酶。据实验室的张裕君博士介绍，Takara公司的speed star DNA聚合酶扩增效果不错，货号：DRR070A，可惜我没有试过。

最后要强调的就是你的染色剂的问题。目前实验室常用的染色剂是EB，万万不可想当然的以为实验的成功与否与此无关。当拿到一个PCR扩增产物时，如果你通过EB染色没有发现可见基因条带，那可能有两种可能：第一，扩增失败；第二，扩增成功，但EB染色剂质量不好或浓度不够，这时重新定制或提高EB的浓度很可能会让你有意外的惊喜。

强调一点，我们提出的方法最初在南农线虫实验室研制成功，2003年我把这种方法带到了天津检验检疫局植物检疫实验室，也获得了成功。因此，这种方法的稳定性应该是有保障的，问题应该不会太大。如果可能的话，一方面，我希望国内的同行能来天津交流，另一方面，我会努力在国内其它的实验室对该技术方法进行重现性测试，争取将这项技术再改进，最好能在国内推广，这也是我的最大心愿。

最后，祝愿我的同行们在植物检疫事业上做出卓越的成绩、工作顺利！同时，我真心希望能够与你们保持良好的私人关系！

参考阅读

单条植物线虫DNA微量提取http://www.sciencenet.cn/blog/user_content.aspx?id=9924

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