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蛋白浓缩的方法

已有 12668 次阅读 2009-6-2 21:52 |个人分类:生活点滴|系统分类:科研笔记| 蛋白浓缩的方法

蛋白浓缩方法有:
丙酮沉淀法;免疫沉淀法;三氯醋酸沉淀法;硫酸铵沉淀法;(低温)有机溶剂沉淀法;聚乙二醇沉淀法;超滤法;透析法;离子交换层析和冷冻干燥法……
1,丙酮沉淀法;三氯醋酸沉淀法试验要求的仪器简单,但是常常导致蛋白质变性。
2,免疫沉淀法:得有特异性抗体
3,硫酸铵沉淀法:利用高浓度盐将蛋白质析出(盐析)
选择硫酸按是因为:盐析有效性,pH范围广,溶解度高,溶液散热少,经济,大多数的蛋白都可以用资格方法
4,(低温)有机溶剂沉淀法:强调低温(0-4度以下)是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性,可用乙醇,丙酮……注意:Mg2 离子,pH值
5,聚乙二醇沉淀法:使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性!他溶解是散热低,形成沉淀的平衡时间短,通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉淀!
6,超滤法:主要针对小体积蛋白质溶液(几ml)此法不易引起变性,不过得有浓缩器,不是哪个实验室都有的
7,透析法:主要用于更换蛋白质的缓冲液,得有透析袋。不需要特殊的仪器 。一般用得是PEG20000进行实验,简单,快速,对蛋白没什么影响
8,离子交换层析:可用阴离子交换树脂进行浓缩
9,冷冻干燥法:在冷冻状态下让样品中的液体升华 ,需要冷冻干燥机,该方法对蛋白活性保存最好。                    

 

10, 凝胶浓缩法
  选用孔径较小的凝胶,如SephadexG25或G50,将凝胶直接加入蛋白溶液中。根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。放入冰箱内,凝胶粒子吸水后,通过离心除去。
11, 浓缩胶浓缩法
  浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml~150ml。它能吸收低分子量的物质,如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等,适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后,蛋白质的回收率可达80%~90%。比凝胶应用方便,直接加入被浓缩的溶液中即可。必须注意,浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点,否则在浓缩胶表面产生阳离子交换,影响浓缩物质的回收率。

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