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伊利诺伊大学的研究人员用一种新的CRISPR-Cas9基因编辑系统能将基因高效插入人类细胞,通过对要插入的DNA末端进行化学调整,新技术的效率是目前方法的5倍。而这是利用CRISPR进行临床基因治疗应用的必要步骤。
为了寻找提高效率的方法,Huimin Zhao的团队研究了13种不同的方法来修改插入的DNA。他们发现,DNA末端的微小变化提高了插入的速度和效率。研究人员测试了在基因组的多个点插入不同大小的末端修饰DNA片段,使用CRISPR-Cas9精确定位特定的插入位点。他们发现,即使插入较大的DNA片段(这是最难插入的),效率也提高了2到5倍。
“我们推测效率提高了很多,因为末端的化学修饰稳定了我们插入的DNA,”Huimin Zhao说,“正常情况下,当你试图将DNA转移到细胞中时,它会被酶从末端降解。我们认为我们的化学修饰可以保护末端。更多的DNA进入细胞核,而且DNA更稳定,所以我认为它有更高的机会整合到染色体中。”
https://www.sciencedaily.com/releases/2019/12/191223122915.htm
Journal Reference:
Yi Yu, Yijun Guo, Qiqi Tian, Yuanqing Lan, Hugh Yeh, Meng Zhang, Ipek Tasan, Surbhi Jain, Huimin Zhao. An efficient gene knock-in strategy using 5′-modified double-stranded DNA donors with short homology arms. Nature Chemical Biology, 2019; DOI: 10.1038/s41589-019-0432-1
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