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RNA测序(RNA sequencing)是一种通过观察基因表达来分析整个基因组的技术。如今,这种全基因组表达分析是基因组研究的标准工具,因为它们依赖于高通量技术,而这些技术本身已经变得广泛可用。
尽管如此,RNA测序仍然是昂贵和费时的,因为它首先需要昂贵的准备一个完整的基因组库——由细胞RNA生成的DNA池——而数据本身也很难分析。所有这些都使得RNA测序难以运行,使得它的采用没有它可能的那么广泛。
在单细胞转录组学(single-cell transcriptomics)的革命推动下,一些新的方法得到了帮助。单细胞转录组学使用所谓的“样本条形码( "sample barcoding" )”或“多路复用("multiplexing." )”。在这里,在库准备过程中,将单个“条形码”序列添加到每个DNA片段中,以便在分析最终数据之前对每个片段进行识别和分类。--这意味着这种方法只需要一个包含多个不同样本或细胞的库。
条形码既降低了成本,又缩短了时间,这可以扩展到大样本的批量RNA测序(bulk RNA sequencing)。但是在批量RNA样本的可靠和廉价分析的适应和验证技术方面仍然存在困难——这就是我们在分析细胞或组织的转录组时所面临的问题。
现在,来自EPFL生物工程研究所Bart-Deplancke实验室的科学家们开发了一种新的方法,称为批量RNA条形码和测序(Bulk RNA Barcoding and sequencing,BRB-seq),它比传统的商业RNA测序技术(Illumina的TruSeq)便宜25倍。
BRB-seq的诸多优点之一是快速且保持了链的特异性,这是该领域的一个挑战,必须在正确的方向上转录DNA。因此,BRB-seq提供了一种在数百个RNA样本上执行转录组学的低成本方法,这可以在一次运行中增加生物重复的数量(因此实验的准确性)。
在性能方面,科学家发现BRB-seq可以在相同的测序深度检测到与该领域“金标准”相同数量的基因,即TruSeq Stranded mRNA,并且该技术即使在低质量的RNA样本中也能产生可靠的数据。此外,它产生全基因组转录组数据的成本相当于使用RT-qPCR分析四个基因,而RT-qPCR目前是测量基因表达的标准但通量低的方法。
https://www.sciencedaily.com/releases/2019/04/190418201325.htm
Journal Reference:
Daniel Alpern, Vincent Gardeux, Julie Russeil, Bastien Mangeat, Antonio C. A. Meireles-Filho, Romane Breysse, David Hacker, Bart Deplancke. BRB-seq: ultra-affordable high-throughput transcriptomics enabled by bulk RNA barcoding and sequencing. Genome Biology, 2019; 20 (1) DOI: 10.1186/s13059-019-1671-x
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