做生命科学研究,几乎每个实验室都用抗体,因此,抗体的效价对试验尤为重要。不知是运输还是抗体批次缘故,好多抗体效价并不令人满意,本人实验室就买到一点效价都没有的抗体,如果不进行点膜,检测抗体效价,匆忙试验,就造成时间和标本的浪费。所以,目前,我建议我们实验室对新买的抗体先进行抗体效价鉴定,然后做试验。我做抗体点膜的基本步骤如下
(1)用TBST配制5%BSA或脱脂奶粉,取0.5微升抗体溶解于上述溶液50微升,稀释度为1:100,然后对比稀释成1:200,1:400,1:800(当然可以有更高的稀释度)
(2)各取10微升点膜(作好标记),晾干,室温约10分钟
(3)用5%BSA或脱脂奶粉封闭2小时
(4)加相应的二抗(我们实验室是用Rockland的荧光二抗),室温2小时
(5)回收二抗,用TBST洗三次,每次15分钟。
(6)扫描(我们用的是Odyssey Fluorescent Scanner (LI-COR Bioscience, USA),很好用哦。
下面是我做的两个个抗体的效价检测,一个抗体根本就没有效价,目前正在和公司交涉。
https://blog.sciencenet.cn/blog-390931-327393.html
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