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NB基本培养基(右边的为N6,大量相同,加glycine甘氨酸2 mg/L)
KNO3 2830 mg/L
(NH4)2SO4 463 mg/L
KH2PO4 400 mg/L
MgSO4.7H2O 185 mg/L
CaCl2.2H2O 166 mg/L
FeSO4.7H2O 27.8mg/L 5.6
Na2EDTA 37. 5 mg/L 7.5
MnSO4.4H2O 10 mg/L 27.8
H3BO3 3 mg/L 1.6
ZnSO4.7H2O 2 mg/L 1.5
Na2MoO4.2H2O 0.25 mg/L 0.25
CuSO4.5H2O 0.025 mg/L 0.025
CoCl2.6H2O 0.025 mg/L 0.025
KI 0.75 mg/L 0.8
盐酸硫胺素 thiamine CHL VB1 10 mg/L 0.1
盐酸吡哆醇 pyridoxine-CHL VB6 1 mg/L 0.5
烟酸 nicotinic acid 1 mg/L 0.5
肌醇 myo-inositol 100 mg/L 100
水解酪蛋白 300 mg/L
谷氨酰胺 500 mg/L
脯氨酸 500 mg/L
蔗糖 30,000 mg/L
PHytagel 2.6 mg/L
pH 5.8
Basic培养基
B N6(大量) 50ml (20倍)
A Ms-Fe盐 10-20ml(100倍) CH
S B5 macro 10ml (100倍) phytogel
I B5 vita 10ml (100倍) sucrose
C proline
N6 (大量梗稻种子) 终浓度 母液(20倍) 终浓度 母液(20倍)
培 KNO3 2830mg/L
养 (NH4)2SO4 463 mg/L
基 KH2PO4 400 mg/L
制备 1 KNO3, (NH4)2SO4, KH2PO4同时倒入烧杯,加水搅拌, 使之完全溶解.
2 MgSO4.7H2O 先溶于加了100ML水的烧杯中溶解后再缓慢倒入1中,边倒边搅, 不能有沉淀.
3 CaCl2.2H2O的配制同MgSO4.7H2O
4 配好后放于棕色瓶
MS(大量籼稻种子) 终浓度 母液(20倍) 终浓度 母液(20倍)
培KNO3 1900 mg/L
养NH4NO3 1650 mg/L
基KH2PO4 170 mg/L
制备 1 KNO3, NH4NO3, MgSO4.7H2O同时倒入烧杯,加水搅拌
2 KH2PO4先溶于加了100ML水的烧杯中溶解后再缓慢倒入1中,边倒边搅,
3 CaCl2.2H2O同KH2PO4
4 配好后放于棕色瓶
Ms(大量花药用) 终浓度 母液(20倍) 终浓度 母液
元素KNO3 2830mg/L
培养(NH4)2SO4 231 mg/L
基 KH2PO4 641 mg/L
制备 1 KNO3, (NH4)2SO4, KH2PO4同时倒入烧杯,加水搅拌
2 MgSO4.7H2O 先溶于加了100ML水的烧杯中溶解后再缓慢倒入1中,边倒边搅,
不能有沉淀.CaCl2.2H2O的配制同MgSO4.7H2O
3 配好后放于棕色瓶
YM脓杆菌培养基
KH2PO4
NaCl
Agar
诱导愈伤、继代培养基 basic+2,4-D(2mg/L) PH=5.8
共培养培养基
液体:N6(大)+Fe+B5(micro)+B5(vita)+ sucrose(前四项与basic相同)
+ 肌醇
固体:N6(大)+Fe+B5(micro)+B5(vita)+ sucrose(前四项与basic相同)
+ 肌醇
PH=5.5 加2,4-D前后都要调PH值.灭完菌,温度降下来后加AS
筛选培养基 诱导愈伤+cef(300mg/L)+hyg(50mg/ml) PH=5.5
一筛,二筛的cef,hyg的浓度依次逐渐下降
分化 1: basic+KT(4mg/L)+NAA(0.25mg/L)+cef(300mg/L)+hyg(50mg/L)
培养 2: basic+KT(0.5mg/L)+ NAA(0.25mg/L)+6-BA(2mg/L)+cef(300mg/L)+hyg(50mg/L)
基 PH=5.8
分化培养基NB培养基:6-BA,2.5mg,NAA,0.25mg,KT,0.5mg
壮苗培养基(生根)
sucrose
B5vita 10ml/L agar
MS-Fe盐(必须单独配制,否则会沉淀,用鳌合铁)
终浓度 母液(100倍)
FeSO4.7H2O 27.8mg/L
Na-EDTA 37.5mg/L
制备 1 FeSO4.7H2O溶解于水, Na-EDTA溶解于热水,将两者混合定容,于微波炉中加热,煮沸,
颜色变深,冷却到室温,补水, 棕色瓶
2,4-D母液(
配好后
NAA母液(
PAA母液(
6-BA母液(
AS(乙酰丁香酮)用DMSO直接溶解定容19.62mg/ml,分装到无菌小管
KT 母液(5mg/ml) 用1NKOH溶解,用水稀释定容到10ml,过滤灭菌后分装到EP管中,冰冻保存
B5 vitamin 终浓度 母液(100倍) 终浓度 母液(100倍)
肌醇 100mg/L
pyrido(B6) 1 mg/L
棕色瓶
B5(micro)
KI 0.75mg/L H3BO3 3.0mg/L MnSO4 10mg/L ZnSO4 2.0mg/L Na2MnO4.2H2O 0.25mg/L
CuSO4 0.025mg/L CoCl2 0.025mg/L
程序
1.种子去皮,挑成熟完整健康的种子
2.用70%乙醇清洗浸泡2-3分钟,洗3-4次,用0.1%升汞浸泡20-40分钟
3.无菌水洗3至4次
4.置于虑纸上吹干,吹3小时以上
5.摆放到诱导愈伤培养基上,黑暗中培养15-20天,直到长出黄色较大的愈伤
6.剥下愈伤,转至继代培养基上,黑暗培养2周
7.共培养。脓杆菌与愈伤在液体共培养基中轻轻摇培30分钟,转至共培养基(用虑纸盖住培养基)上,
吹风3-4小时。黑暗培养3天
8.转至筛选培养基上,吹风吹干。黑暗培养2周。转至二筛培养基上,黑暗培养2周,直到长出新的愈伤。
9.转至分化培养基上,黑暗培养一周。然后明暗交替(16小时:8小时)
10. 剪苗后,转至生根壮苗培养基上
11. 移苗到温床,田间。
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