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卵泡是哺乳动物卵巢的基本功能单位,由未成熟的卵母细胞及其周围颗粒细胞和卵泡膜细胞组成。卵泡发育具有有序性与周期性,从静止卵泡被激活到生长选择成为优势卵泡的过程中,作为性索体细胞之一的颗粒细胞起着重要的作用。颗粒细胞通过与卵泡膜细胞直接联系,分泌生长因子和激素。颗粒细胞产生的雌激素及其他内分泌调节物质,引发减数分裂、类固醇生成、卵泡发育、卵丘扩张、黄体化等卵母细胞过程,最终导致成熟排卵。因此,颗粒细胞的增殖、凋亡和分化成为卵泡发育的关键。排卵数又对产羔数起着决定性的作用,颗粒细胞的增殖决定了卵母细胞的生长发育,进而影响卵母细胞排卵,影响产羔数。
RT-qPCR结果显示,GAB2在高产云上黑山羊卵巢组织中的表达量显著高于低产个体,miR-535的表达则相反(P<0.05);随后,RT-qPCR和Western blot结果表明,在颗粒细胞中过表达GAB2后,CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著升高(P<0.05),BAX的表达量显著降低(P<0.05),抑制其表达则与之相反;EdU和CCK8检测显示,GAB2过表达后显著促进颗粒细胞增殖(P<0.05),抑制其表达后则相反;双荧光素酶报告试验表明,miR-535抑制了GAB2基因3’UTR区域的双荧光素酶活性。
GAB2促进山羊颗粒细胞增殖抑制其凋亡
RT-qPCR和Western blot结果显示,在颗粒细胞中过表达miR-535后,GAB2、CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著降低(P<0.05),BAX的表达量显著升高(P<0.05),抑制其表达后则与之相反;EdU和CCK8检测显示,miR-535过表达后抑制颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反;细胞凋亡试验表明,miR-535过表达后促进颗粒细胞凋亡,抑制其表达后则相反。在颗粒细胞中抑制miR-535后,发现PI3K/AKT信号通路标志因子AKT1的表达水平显著升高(P<0.05)。
miR-535抑制山羊颗粒细胞增殖并促进其凋亡
本研究验证了miR-535靶向调控GAB2在颗粒细胞中的表达,并通过激活PI3K/AKT途径促进颗粒细胞增殖。这些研究结果为解析山羊多羔性状形成的分子机制及分子育种提供了新的见解。
论文链接:
《miR-535靶向GAB2基因通过激活PI3K/AKT信号通路促进山羊颗粒细胞增殖》
引用本文:
王鹏, 刘子嶷, 刘玉芳, 储明星. miR-535靶向GAB2基因通过激活PI3K/AKT信号通路促进山羊颗粒细胞增殖[J]. 中国农业科学, 2023, 56(23): 4757-4771.
WANG Peng, LIU ZiYi, LIU YuFang, CHU MingXing. miR-535 Targets the GAB2 Gene to Promote Goat Granulosa Cell Proliferation Through Activation of the PI3K/AKT Signaling Pathway[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2023, 56(23): 4757-4771.
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