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H2DCFDA（DCFH-DA）是一种细胞通透性探针 |MedChemExpress (MCE)

已有 98 次阅读 2024-11-7 09:33 |系统分类:科研笔记

H2DCFDA

MCE 国际站：H2DCFDA

品牌：MedChemExpress (MCE)

CAS：4091-99-0

纯度：99.82%

分子式：C₂₄H₁₆Cl₂O₇

分子量：487.29

存储条件： -20°C,避光保存

运输条件：美国大陆的室温；其他地区可能有所不同。

产品活性：H2DCFDA (DCFH-DA) 是一种可渗透细胞的，用于检测细胞内活性氧 (ROS) 的探针 (Ex/Em=488/525 nm)。

生物活性：H2DCFDA（DCFH-DA）是一种细胞通透性探针，用于检测细胞内的活性氧（ROS）（Ex/Em=488/525 nm）[1]。

体外：指南（以下是我们推荐的方案，本方案仅提供指南，应具体需要进行修改）。 1.1 制备储存液用无水 DMSO 配制 5 mM 的 H2DCFDA 储备液。注：H2DCFDA 储存液建议分装后于-20 ℃ 或-80 ℃ 避光保存。 1.2 工作液的配制用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液，配制成 1-10 μM 的 H2DCFDA 工作液。注：请根据情况调整 H2DCFDA 工作液浓度，且现用现配。 2. 细胞染色（悬浮细胞） 2.1 离心收集细胞，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。细胞密度在 1×106 /mL。 2.2 加入 1 mL 染料工作液，室温孵育 5-30 分钟。 2.3 400 g，离心 3-4 分钟，弃去上清。 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。 2.5 用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。 3. 细胞染色（贴壁细胞） 3.1 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。 3.2 从培养基中移出盖玻片，吸除多余培养基。 3.3 加入 100 μL 染料工作液，轻轻晃动使其完全覆盖细胞，孵育 5-30 分钟。 3.4 吸去染料工作液，用培养基洗 2-3 次，每次 5 分钟，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。注：若需要用流式细胞仪检测，需将细胞用胰蛋白酶消化重悬后再进行染色。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。 0 --> H2DCFDA 相关抗体：过氧化氢酶抗体（YA552）；过氧化氢酶抗体（YA811）

激酶实验：为了检测细胞内的ROS水平，我们采用了ROS敏感探针H2DCFDA。将贴壁细胞（ESC、difESC、eMSC、HeLa、U118）与PBS中的5 µM染色溶液在黑暗条件下在37°C下孵育30分钟，然后用0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液收获，悬浮在新鲜培养基中，并立即用流式细胞仪分析。将对照和PHA激活的淋巴细胞重新悬浮在PBS中，与5 µM H2DCFDA在黑暗条件下在37°C下孵育30分钟，然后立即进行分析。如果有指示，则与H2DCFDA探针一起使用ROS不敏感的荧光染料DCFDA修饰。染色程序与H2DCFDA相同[1]。MCE尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。