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Roflumilast 是一种选择性 PDE4 抑制剂 |MCE

已有 493 次阅读 2024-9-12 11:13 |系统分类:科研笔记

MCE 国际站：Roflumilast

中文名：罗氟司特

CAS：162401-32-3

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：Roflumilast 是一种选择性 PDE4 抑制剂，对 PDE4A1 的 IC₅₀ 分别为 0.7、0.9、0.7 和 0.2 nM 、PDEA4、PDEB1 和 PDEB2，而不影响来自各种细胞的 PDE1、PDE2、PDE3 或 PDE5 同工酶。 IC50 和目标：IC50：0.7 nM (PDE4A1)、0.9 nM (PDE4A4)、0.7 nM (PDE4B1)、0.2 nM (PDE4B2)^[1]

体外：Roflumilast 不影响除 PDE4 之外的 PDE 酶，并且是大多数测试的 PDE4 剪接变体的亚纳摩尔抑制剂。除了 PDE4C（4C1，IC₅₀=3 nM；4C2，IC₅₀=4.3 nM）外，它没有表现出 PDE4 亚型选择性，它被抑制的效力略低<支持>[2]。 Roflumilast 是一种有效的选择性 PDE4 抑制剂。 Roflumilast 是一种单选择性 PDE4 抑制剂，因为它不影响其他 PDE 同工酶，包括浓度高达 10,000 倍的 PDE1、PDE2、PDE3 和 PDE5。 Roflumilast 抑制人中性粒细胞功能。 Roflumilast 抑制单核细胞来源的树突状细胞中的 TNFα 合成。 Rolfumilast 抑制 CD4⁺ T 细胞的增殖和细胞因子合成。效力 (IC₃₀) 为 7 nM^[3] 的 Roflumilast 最多可抑制增殖约 60%。

体内：Roflumilast 的动物研究表明，在豚鼠、小鼠或大鼠短期暴露于烟草烟雾以及大鼠暴露于烟草烟雾和细菌脂多糖的组合后，它减少了支气管肺泡灌洗液中嗜中性粒细胞的积累，并消除了暴露于烟草烟雾 7 个月的大鼠肺实质炎症细胞流入^[2]。 Roflumilast 在 pIgR^−/− 小鼠中阻断 COPD 进展。对于这些研究，9 个月大的 WT 或 pIgR^−/− 小鼠每天通过口服强饲法处理 100 μg 罗氟司特 (5 μg/g) 或载体（4% 甲基纤维素、1.3% PEG400 ) 3 个月，肺在 12 个月大时收获。与载体治疗的 pIgR^-/- 小鼠不同，罗氟司特治疗的小鼠在开始治疗后小气道壁重塑没有进展。引人注目的是，与 9 个月大的 pIgR^−/− 小鼠相比，罗氟司特治疗的 12 个月大的 pIgR^−/− 小鼠肺气肿指数降低，表明罗氟司特不仅阻止了该模型中肺气肿的进展，而且显然有助于解决肺实质的肺气肿性破坏^[4]。

激酶试验：PDE 活性的测定经过一些修改。测定混合物含有 50 mM Tris (pH 7.4)、5 mM MgCl2、0.5 μM cAMP 或 cGMP、以及 [3H]cAMP 或 [3H]cGMP（约 30,000 cpm/测定）、指定浓度的抑制剂和等分试样最终测定体积为 200 μL 的酶溶液。将化合物的储备溶液在上述Tris缓冲液中稀释1:100 (v/v)；在 1% (v/v) DMSO/Tris 缓冲液中制备适当的稀释液，在测定中按 1:2 (v/v) 稀释，以获得所需的抑制剂终浓度，DMSO 浓度为 0.5% (v/五）。 DMSO 本身不影响任何 PDE 活性。在 37°C 预孵育 5 分钟后，通过添加底物（cAMP 或 cGMP）开始反应，并将测定在 37°C 进一步孵育 15 分钟。然后添加 50 μL 0.2 N HCl 以终止反应，并将测定置于冰上约 10 分钟。在 37°C 下与 25 μg 5'-核苷酸酶（响尾蛇蛇毒）一起孵育 10 分钟后，将检测加载到 QAE Sephadex A-25（Poly-Prep 色谱柱中的柱床体积为 1 mL）上。用 2 mL 30 mM 甲酸铵 (pH 6.0) 洗脱柱，并对洗脱液进行放射性计数。结果针对低于总放射性 5% 的空白值（在存在变性蛋白质的情况下测量）进行校正。水解的环核苷酸量不超过原始底物浓度的30%[3]。

动物体内实验:使用小鼠[4] WT或pIgR−/−小鼠。对于使用罗氟司特的研究，200 μL 0.5 mg/mL 罗氟司特悬浮液或赋形剂（4% 甲基纤维素、1.3% PEG400 和每克动物体重 5 μg 药物）通过口服管饲法给药，每周 5 天，每天一次，持续时间为治疗。每天对小鼠口服 100 μg 罗氟司特 (5 μg/g) 或媒介物（4% 甲基纤维素，1.3% PEG400），持续 3 个月，并在 12 月龄时收获肺。

研究领域：Metabolic Enzyme/Protease | Anti-infection

作用靶点：Phosphodiesterase (PDE) | RSV

参考文献：[1]. Hatzelmann A, et al. The preclinical pharmacology of roflumilast--a selective, oral phosphodiesterase 4 inhibitor in development for chronic obstructive pulmonary disease. Pulm Pharmacol Ther. 2010 Aug;23(4):235-56.

[2]. Rabe KF. Update on roflumilast, a phosphodiesterase 4 inhibitor for the treatment of chronic obstructive pulmonary disease. Br J Pharmacol. 2011 May;163(1):53-67.

[3]. Hatzelmann A, et al. Anti-inflammatory and immunomodulatory potential of the novel PDE4 inhibitor roflumilast in vitro. J Pharmacol Exp Ther. 2001 Apr;297(1):267-79.

[4]. Richmond BW, et al. Airway bacteria drive a progressive COPD-like phenotype in mice with polymeric immunoglobulin receptor deficiency. Nat Commun. 2016 Apr 5;7:11240.

[5]. Ding H, et al. Treatment of obesity-associated overactive bladder by the phosphodiesterase type-4 inhibitor roflumilast. Int Urol Nephrol. 2017 Jul 29.