抑制 B细胞受体(BCR)信号通路是治疗多种 B 细胞恶性肿瘤的有效途径。 Kamil Bojarczuk 等,使用十个具有不同遗传背景的原发性 DLBCL 亚群细胞，用于BCR/PI3K 的信号传导干扰和 BCL-2 表达失调的相关研究。DLBCL 是一种基因异质性的转录疾病分为生发中心 B 细胞(GCB)和 活化 B 细胞(ABC) 两种亚型疾病。GCB和 ABC 型 DLBCL 的亚基团都依赖于近端 B 细胞受体(BCR)信号通路。BCR 相关蛋白 CD79a 和 b 磷酸化后，下游通过 SYK、PI3K/AKT 和 BTK/PLCg/NF-kb 传递信号，发挥相应的生物学效应。

      研究人员分析了被 AKT19 转录调节的抗凋亡蛋白 BCL-2 家族成员，MCL-1。低 NF-kB 活性依赖 BCR 的 DLBCL 细胞系(DHL4, DHL6, LY1, LY7)在 SYK 或 PI3K α/β 抑制后，MCL-1 表达显著下调(如Figure1. 所示)。另外一个具有增加 PI3K/AKT 活性的遗传基础的系(Karpas422)在 PI3K 阻断后，也降低了 MCL-1 水平。

Figure1. BCR 信号抑制剂对促凋亡和抗凋亡 BCL2 家族成员的表达有不同的调节作用

      基于已经 BCR 信号抑制剂对于凋亡的影响，研究人员继续深入探讨，利用回归正交试验的方式，发现 Copanlisib 诱导的细胞凋亡依赖于 BCL-xL和 MCL-1介导的线粒体应答进程。随后，研究人员分析了在 BCR 依赖型 DLBCL 细胞中（低浓度的 NF-kb），MCL-1 所发挥的抗凋亡相关作用。通过药理学抑制或基因敲除 MCL-1 与 Venetoclax 协同作用于 DHL4 和 DHL6 两种细胞。研究结果表明， 在 BCR 依赖型 DLBCL 细胞中，BCL-2 的异构会增强 PI3K α/β 的结合和 BCL-2 阻滞敏感性（如 Figure2.所示）。

Figure 2.Copanlisib 使 DLBCL 细胞 对 Venetoclax 敏感

      研究人员，将 Copanlisib 和 Venetoclax 联合作用于 DLBCL 细胞模型中，研究它们的作用效果。在具有共同的基因背景（BCL-2 调节异常）的 DLBCL 细胞系中发现，Copanlisib 和 Venetoclax 在 DHL4，DHL-6,LY1,HBL1 和 TMD 8 中均发挥协同作用。这些体外结果表明，Copanlisib 和 Venetoclax 在 BCR 依赖型的 DLBL 细胞中，可发挥协同作用（如 Figure3.所示）。

 Figure 3. 在 DLBCL 细胞模型中，Copanlisib 与 Venetoclax 联合使用具有协同作用

       在体外细胞实验中发现了 Copanlisib 和 Venetoclax 的协同作用后，研究人员转向该种联合用药在体内异种移植裸鼠中的作用。体外实验分为载体空白组，Copanlisib 组； Venetoclax 组；联合用药组。单独使用 Copanlisib实验组，在第1,2,8,9,15,16 天，以 12 mg/kg 的剂量尾静脉注射处理小鼠。单独使用Venetoclax 实验组，连续给药 21 天，以 100 mg/kg 的口服灌胃处理小鼠。所有的实验处理在 21 天结束。如图4所示，单独使用 Copanlisib 时并不能延缓肿瘤的生长或有治疗性的改善。但值得注意的是，联合使用 Copanlisib 和 Venetoclax 可以显著地延缓肿瘤的增殖（P<0.0001）。在本次实验的最后（第 139天时），在联合使用 Copanlisib和 Venetoclax 的裸鼠中，仅有 25% 的裸鼠死亡，75% 的裸鼠呈一种无肿瘤的状态。

Figure 4. 在 DLBCL 异种移植肿瘤模型中，Copanlisib 与 Venetoclax 联合使用具有协同作用

参考文献

Bojarczuk K, et al. Targeted inhibition of PI3Kα/δ is synergistic with BCL-2 blockade in genetically defined subtypes of DLBCL.Blood. 2019 Jan 3;133(1):70-80. 

小M 的小思考：

   随着精准医学时代的来临， 靶向治疗和联合治疗可以为越来越多的患者提供个性化的诊疗服务。 根据《Blood》的研究报道，Copanlisib 和 Venetoclax 的协同作用有望成为 DLBCL 治疗的新方式。

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