利用 Cas-CLOVER 和 Super PiggyBac 工程在酿酒酵母中生成杀虫 RNAi 酵母菌株来靶向蚊子

RNAi 酵母杀虫剂的全球部署包括从使用实验室酵母菌株转向使用适合规模化发酵的更强大的菌株。在本研究中，RNA 引导的 Cas-CLOVER 系统与 Piggybac 转座酶结合使用，产生了具有多个 Sh.463 短发夹 RNA (shRNA) 杀虫剂表达盒整合拷贝的强健酿酒酵母菌株（图 1）。 

图 1. Cas-CLOVER 工程用于增强酿酒酵母生物加工平台

这使得杀虫shRNA的组成型高水平表达与蚊子Shaker基因中保守的目标序列相对应，但在非目标生物体中未发现。在针对伊蚊、库蚊和按蚊幼虫和成蚊进行的杀虫剂试验中，最高表达的 Cas-CLOVER 菌株表现良好，这些蚊子在食用酵母后死亡（图 2）。 

图 2. Cas-CLOVER/piggyBac 合成的表达 Sh.463 shRNA 的酵母菌株的杀成虫活性

规模化发酵促进了酵母的公斤级生产，随后将其热灭活并干燥（图 3）。

图 3. 在使用 DMT9-56.10R #3 酵母菌株的中试规模发酵中观察到的生长曲线和 Sh.463 shRNA 表达

这些研究表明 RNAi 酵母杀虫剂的生产可以规模化，这一进步有一天可能会促进这种新的蚊子控制干预措施的全球分布。

https://doi.org/10.3390/jof9111056