外源 dsRNA 在苹果黑星菌 Venturia inaequalis 中触发 RNAi，导致靶基因下调和生长减弱

苹果黑星菌Venturia inaequalis 是一种引起苹果黑星病的真菌病原体。它是一种具有高度传染性和破坏性的病原体，如果不加以管理，会迅速在周围果园蔓延。管理和控制病害需要在苹果的不同生长阶段喷洒多种杀菌剂。持续喷洒杀菌剂还会引起环境问题。在此，通过开发目标特异性基因构建体来合成相应的双链 RNA (dsRNA)，展示了使用喷雾诱导基因沉默 (SIGS) 的潜力。

发现外源应用 dsRNA 可减少培养皿上 V. inaequalis 的菌丝生长和孢子形成。选择V. inaequalis 的四个基因（即 CIN1、CE5、VICE12 和 VICE16）作为目标基因，用于开发表达相应 dsRNA 的基因构建体。在培养生物测定实验中，评估了外源提供的体外合成 dsRNA 对 V. inaequalis 的生长和孢子形成的影响。

图 1.不同dsRNA处理后菌丝和分生孢子计数情况 

使用定量 PCR 评估了处理菌和对照菌中目标基因的表达水平。用 VICE12 靶向 dsRNA 处理真菌后，菌落大小（约 55%）、分生孢子形成（约 93%）和相应基因的表达水平（2.2 倍）均有最大程度的降低，其次是 CIN1-dsRNA。VICE16-dsRNA 处理的效果最差，生长量减少了 32%，对分生孢子的形成没有显著影响，相应目标基因的表达水平下降了 1.13 倍。

这项研究结果验证了外源dsRNA 在 V. inaequalis 中诱发 RNAi，并且基于喷雾诱导基因沉默 (SIGS) 的解决方案可能会减轻苹果作物未来针对苹果黑星病的杀菌剂使用负担。

图 3.实验流程和机制示意图

https://doi.org/10.1007/s11033-023-08736-3