无标记转基因衣藻对控制伊蚊种群和浮游生物的影响

世界上超过一半的人口患有由蚊子传播的流行病。用于阻止蚊媒疾病传播的主要策略是病媒控制。RNAi 是控制昆虫种群的有力工具，并且可能比其他策略更不容易受到昆虫抗性的影响。然而，由于抗生素抗性标记基因在整合到受体基因组后转移到环境微生物中，从而使病原体获得抗性，引起了公众的关注。因此，在本研究中，我们对 3-羟基犬尿氨酸转氨酶 (3hkt) 和激素受体 3 (hr3) RNAi 载体进行了修饰，以去除抗生素抗性标记基因并保留 3hkt/hr3 靶基因反向重复序列的表达盒。随后在模拟田间试验中将这种重组的无微藻标记 RNAi 杀虫剂添加到郊区水中，以测试其控制蚊子数量的能力。

通过酶切回收获得不含氨苄青霉素抗性基因的3hkt/hr3反向重复序列表达盒和精氨基琥珀酸裂解酶基因DNA片段。衣藻共转化后，重组藻类被用来喂养白纹伊蚊幼虫(图 1)。 

图 1. 协同转化策略示意图

10 只和 300 只幼虫分别用于小型和大型实验室白纹伊蚊喂养试验。使用辅以重组衣藻的梅社河水进行了模拟田间试验。此外，通过高通量测序探索了重组微藻对释放水中浮游植物和浮游动物的影响。无标记 RNAi 重组衣藻有效地沉默了 3hkt/hr3 靶基因，从而抑制了 Ae。albopictus 的发展和Ae 的发生率也很高（图 2）。 

图 2. 饲喂后对蚊子幼虫的影响

白纹伊蚊幼虫在实验室和模拟田间试验中的死亡率（图 3）。

图 3. 田间模拟测试

此外，结果证实，重组衣藻对释放水体中浮游生物的影响与非转基因衣藻相似，可减少浮游生物的丰度和种类（图 4）。

图 4. 水体中浮游生物的影响

无标记 RNAi 重组衣藻对 Ae 具有高度致死性。对释放水中浮游生物的影响与非转基因藻类相似，减少了浮游生物的丰度和种类。因此，无标记重组衣藻可用于蚊子生物合理控制和蚊媒疾病预防。

关注我们：