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RNA 干扰酚氧化酶增强草地贪夜蛾对苏云金芽孢杆菌蛋白 Vip3Aa19 的易感性
酚氧化酶 (PO) 是细胞免疫系统中的一种重要酶,参与防御包括苏云金芽孢杆菌在内的多种病原体。Vip3Aa19由苏云金芽孢杆菌(Bt)在指数生长期中期分泌表达,是一种对草地贪夜蛾具有高效杀虫活性的蛋白质。然而,目标昆虫的免疫反应被认为是 Bt 致病性的障碍。本文报道了从草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)的血细胞转录组数据中鉴定出的两个酚氧化酶 (PO) 基因(SfPAE 和 SfPO2)。qRT-PCR 验证结果表明,与饲喂无杀虫剂人工饲料的 S. frugiperda 相比,Vip3Aa19 (LC50 = 4.98 μg/g) 毒素处理后两个 PO 基因的表达水平显著上调。同时,即使没有免疫攻击,也有两个 PO 基因从卵到成虫阶段表达。我们注意到,在 S. frugiperda 研究的所有发育阶段,SfPAE 的表达水平普遍高于 SfPO2。然而,在 Vip3Aa19 处理后,SfPO2 基因 mRNA 表达水平响应毒素攻击显著升高。针对 PO 注射特定的双链 RNA (dsRNA) 可以抑制其表达。用 dsRNA 处理的 S. frugiperda 的第三龄幼虫比对照幼虫更容易受到 Vip3Aa19 毒素的影响。值得注意的是,注射 dsPO2 后死亡率接近 90%(图 1)。
图 1. 不同 dsRNA 处理的幼虫死亡率和体重比较
这些结果证明 SfPO2 对 S. frugiperda 的生存更为重要。最后通过RNA干扰和PO活性检测发现PO基因主要存在于血淋巴中,在针对Bt毒素的免疫防御中发挥重要作用。
原文链接:
https://doi.org/10.3390/insects13111041
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