文章背景

Remdesivir (RDS) 是一种抗病毒药物，用于治疗 SARS-Cov-2 病毒的大流行危机。本研究利用无有机溶剂-液相色谱技术 (HPLC) 研究了 RDS 在多种降解途径下的稳定性，分析了 RDS 在温和到剧烈的降解条件下产生的杂质，并根据国际协调会议指南对该方法进行了验证。本研究根据两个新指标——绿色分析程序指数 (GAPI) 和绿色指标分析方法 (AGREE) 对该方法进行了绿色评估，并与以前报告的色谱法进行了比较，证明该研究是首次被报道为用于 RDS 测定和杂质分析的环保、无溶剂和稳定性的液相色谱 (LC) 方法。

引言

RDS (结构如图 1 所示) 是一种腺苷核苷酸类似物，在人体内被激活成活性病毒 RNA 聚合酶抑制剂。

图1. RDS 的化学结构。

色谱分离条件

将 0.025 M 非离子聚氧乙烯表面活性剂 (Brij-35)、0.1 M 阴离子十二烷基硫酸钠 (Sodium Lauryl Sulfate, SLS) 和 0.02 M 磷酸氢二钠溶于 1 L 去离子水中，调节 pH 为 6.0，制备流动相。在方法验证期间，流动相在色谱柱上以 1 mL min-1 的流速等比例过滤、脱气和洗脱 9 min，波长为 244 nm。

储备溶液、标准溶液和药物剂型的制备

RDS 储备溶液：将 50.0 mg 粉末溶解在 10 mL MeOH 中，超声 2 min 后，将其储存在 50 mL 琥珀色玻璃瓶并保存在冰箱中 (2-8 ℃)。

质量控制 (Quality Control, QC) 标准溶液：将 RDS 原液加入含有 1 mg mL-1 β-环糊精磺丁基醚钠 (BCD-SE) 中，调节 pH 值至 4.0。

通过稀释药物剂型 Remdesivir-Rameda® I.V. 检测 RDS 的含量。

药物强制降解

作者将 RDS 在浓度条件为 1 mg mL-1 时进行降解。

碱性水解：在 0.1 N NaOH 中进行，条件分别为在 25 ℃ 下处理 0.5 h、在 25 ℃ 下处理 3 h 和在 45 ℃ 下处理 1 h。

酸性水解：在 0.1 N HCL 中进行，条件分别为在 40 ℃ 下处理 1 h、在50 ℃ 下处理 1 h。

氧化降解：在 4.5% 的 H2O2 中进行，条件分别为在 40 ℃ 下处理 1 h、50 ℃ 下处理 1 h。

光降解：在 365 nm 紫外灯下进行，时长为 24 h。

研究结果

分析方法验证

如图 2 所示，在纯 RDS 和 RDS Remdesivir-Rameda® 药物剂型的色谱图中，两个 RDS 峰是相同的，表明没有来自辅料的干扰。

图2. 色谱图：(A) RDS 纯液 (80 μg mL−1)，(B) 稀释 Remdesivir-Rameda®IV 注射液。

无有机溶剂HPLC法的稳定性

为了明确分析方法的稳定性指示能力，必须在更剧烈的条件下对分析物进行强制降解。如图 3 所示，即使在最温和的碱性降解 (0.1 N NaOH，25 °C / 0.5 h) 下，RDS 降解也高达近 95%。

图3. RDS 在 0.1 N NqOH，25 ℃/0.5 h 条件下的降解能力色谱图。

方法应用

该无有机溶剂 HPLC 方法已应用于上市剂型 Remdesivir-Rameda® 中 RDS 的检测。表 1 为无有机溶剂 HPLC 法的检测结果，结果证明该方法和已有的 LC 方法之间没有任何明显的差异。

表1. 无有机溶剂 HPLC 法在 Remdesivir-Rameda® 中的 RDS 测定。

与其他 LC 方法的比较和评估

表 2 对无有机溶剂 HPLC 法与其他五种 LC 方法进行了比较，同时使用了两个最新评估指标：GAPI 和 AGREE。GAPI 是由 15 个五角星组成的数字，每个五角星代表分析过程中的一个步骤。它使用三种颜色评估分析方法的结果，红色表示对环境高度影响，黄色为中度影响，绿色表示对环境影响较小。另一个指标是 AGREE，它基于绿色分析化学 (Green Analytical Chemistry, GAC) 原则。AGREE 以钟形图案为特色。时钟的周长分为 12 个扇区，每个扇区代表一个 GAC 原理。GAPI 和 AGREE 保留了相同的颜色编码。如表 2 所示，无有机溶剂 HPLC 法在 GAPI 和 AGREE 中都具有最环保性。

表2. 无有机溶剂 HPLC 的分析方法与其他 LC 方法的比较。

除了在环保性方面具有优势之外，无有机溶剂 HPLC 法也是唯一被报道的无溶剂法。此外，本研究采用可生物降解的流动相胶束组分。以前报道的 LC 方法应用于生物组织，它们需要从简单的蛋白质沉淀到复杂的高级提取的提取步骤。拟研究的 GAPI 象形图中唯一的红色区域 (也存在于其他报道的方法中) 对应于 QC 实验室分析仪器的离线采样和定位，这是制药企业的监管要求。

研究表明，无有机溶剂 HPLC 法对生态影响较小，且具有成本效益、稳健设计和高可预测性。因此，本研究建议将无有机溶剂 HPLC 法应用于测试分析物的任何组合的质量控制定量中，作为以前报告 LC 方法的绿色替代品。

研究结论

本研究开发并验证了一种新型、简单、快速和经济的无有机溶剂 HPLC 法，可用于检测 COVID-19 治疗药物之一 RSD，该方法可以在不受干扰的情况下对药物进行应力降解。无有机溶剂 HPLC 法绿色环保、成本低，可用于 RSD 的常规质控分析，具有较高的可预见性。作者通过对 GAPI 和 AGREE 绿色指标的评估，发现该方法的生态影响最低。

原文出自 Separations 期刊

Ibrahim, A.E.; Deeb, S.E.; Abdelhalim, E.M.; Al-Harrasi, A.; Sayed, R.A. Green Stability Indicating Organic Solvent-Free HPLC Determination of Remdesivir in Substances and Pharmaceutical Dosage Forms. Separations 2021, 8, 243.

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Separations 期刊介绍

主编：Frank L. Dorman, The Pennsylvania State University, USA

期刊主要涵盖分离纯化科学和技术相关领域。目前已被 SCIE、Scopus 等重要数据库收录。

2021 Impact Factor：3.344

2021 CiteScore：2.5

Time to First Decision：13 Days

Time to Publication：33 Days