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Selumetinib (AZD6244) 是选择性的、非 ATP 竞争性口服 MEK1/2 抑制剂 |MCE

已有 182 次阅读 2024-9-29 10:22 |系统分类:科研笔记

MCE 国际站：Selumetinib

中文名：司美替尼

CAS：606143-52-6

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：Selumetinib (AZD6244) 是选择性的、非 ATP 竞争性口服 MEK1/2 抑制剂，对 MEK1 的 IC₅₀ 为 14 nM。 Selumetinib (AZD6244) 抑制 ERK1/2 磷酸化。 IC50 和目标：IC50：12 nM (MEK)^[4]，14 nM (MEK1)^[3]

体外：Selumetinib (AZD6244) 引起原代 DNA 合成和细胞活力的时间和剂量依赖性降低，在原代 2-1318 细胞中诱导生长停滞和与 ERK 失活相关的细胞凋亡^[1]。Selumetinib (AZD6244) (1µM) 通过 G0/G1 期阻滞对 H-441、H-1437 细胞显示抗增殖作用^[2]。Selumetinib (AZD6244) 结果抑制几种含有 B-Raf 和 Ras 突变的细胞系的生长，但对正常成纤维细胞系没有影响^[3]。

体内：Selumetinib (AZD6244, 50 和 100 mg/kg, po) 以剂量依赖的方式降低 4-1318 异种移植物的生长速率；以 50 mg/kg 的剂量给予 AZD6244 时，还会显着抑制 5-1318、2-1318、26-1004 和 29-1104 异种移植物的生长^[1]。 Selumetinib (ARRY-142886, 10, 25, 50, or 100 mg/kg, po) 能够抑制裸鼠体内 ERK1/2 磷酸化和 HT-29 异种移植肿瘤的生长。在 BxPC3 异种移植模型中也观察到肿瘤消退^[3]。

激酶试验：MEK1 的活性通过测量 [γ-33P]ATP 中的 [γ-33P]磷酸盐掺入 ERK2 来评估。该测定在 96 孔聚丙烯板中进行，孵育混合物 (100 μL) 由 25 mM HEPES (pH 7.4)、10 mM MgCl2、5 mM β-磷酸甘油、100 μM 原钒酸钠、5 mM DTT、5 nM MEK1、1 μM ERK2 和 0 至 80 nM 司美替尼（终浓度为 1% DMSO）。通过添加 10 μM ATP（0.5 μC k[γ-33P]ATP/孔）启动反应，并在室温下孵育 45 分钟。加入等体积的25%三氯乙酸终止反应并沉淀蛋白质。沉淀的蛋白质被捕获在玻璃纤维 B 滤板上，用 0.5% 磷酸洗掉过量的标记 ATP，并在液体闪烁计数器中对放射性进行计数。 ATP 依赖性是通过改变反应混合物中 ATP 的量来确定的。

细胞试验：原代HCC细胞以每孔2.0×104的密度接种在生长培养基中。在生长培养基中培养 48 小时后，用 MEM 冲洗细胞单层两次。用不同浓度的 Selumetinib（AZD6244、0、0.5、1.0、2.0、3.0 和 4.0 μM）处理细胞 24 或 48 小时。细胞活力通过 MTT 测定来测定。按照制造商的描述，使用溴脱氧尿苷试剂盒测定细胞增殖。实验至少重复三次，数据表示为平均值±SE。

动物体内实验:为了研究 Selumetinib (AZD6244) 对 HCC 异种移植物的影响，将 AZD6244 以适当的浓度悬浮在水中。携带 HCC 异种移植物的小鼠每天两次口服给药，每公斤体重 100 μL 水 (n=12) 或 50 mg (n=12) 或 100 mg (n=12) AZD6244，持续 21 天，从肿瘤植入后第7天开始。通过游标卡尺测量肿瘤的长度（a）和宽度（b），每周至少监测两次已建立的肿瘤异种移植物的生长。肿瘤体积计算为(a × b2)/2。 ADZ6244最后一次给药后3小时处死动物，记录体重和肿瘤重量，并收获肿瘤用于分析。

研究领域：MAPK/ERK Pathway | Apoptosis

作用靶点：MEK | Apoptosis

参考文献：[1]. Huynh H, et al, Targeted inhibition of the extracellular signal-regulated kinase kinase pathway with AZD6244 (ARRY-142886) in the treatment of hepatocellular carcinoma. Mol Cancer Therapy, 2007, 6 (1), 138-146.

[2]. Garon EB, et al. Identification of common predictive markers of in vitro response to the Mek inhibitor selumetinib (AZD6244; ARRY-142886) in human breast cancer and non-small cell lung cancer cell lines. Mol Cancer Thera, 2010, 9 (7), 1985-1994.

[3]. Yeh TC, et al. Biological characterization of ARRY-142886 (AZD6244), a potent, highly selective mitogen-activated protein kinase kinase 1/2 inhibitor. Clin Cancer Res, 2007, 13 (5), 1576-1583.

[4]. Sebolt-Leopold JS, et al. Targeting the mitogen-activated protein kinase cascade to treat cancer. Nat Rev Cancer. 2004 Dec;4(12):937-47.

[5]. Dela Cruz FS, et al. A case study of an integrative genomic and experimental therapeutic approach for rare tumors: identification of vulnerabilities in a pediatric poorly differentiated carcinoma. Genome Med. 2016 Oct 31;8(1):116.

[6]. Weisberg E, et al. Upregulation of IGF1R by mutant RAS in leukemia and potentiation of RAS signaling inhibitors by small-molecule inhibition of IGF1R. Clin Cancer Res. 2014 Nov 1;20(21):5483-95.