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Belinostat 是一种有效的 HDAC 抑制剂 |MedChemExpress

已有 177 次阅读 2024-9-29 10:20 |系统分类:科研笔记

MCE 国际站：Belinostat

中文名：贝利司他

CAS：866323-14-0

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：Belinostat (PXD101; PX105684) 是一种有效的 HDAC 抑制剂，在 HeLa 细胞提取物中的 IC₅₀ 为 27 nM。 IC50 和目标：IC50：27 nM（HDAC，在 HeLa 细胞中）^[1]，82 nM (HDAC6)^[2]

体外：Belinostat (PXD101) 在肿瘤细胞系中诱导组蛋白 H4 乙酰化的浓度依赖性 (0.2-5 μM) 增加。 Belinostat 在体外对许多肿瘤细胞系具有细胞毒性，通过克隆形成测定确定其 IC₅₀ 范围为 0.2-3.4 μM，并诱导细胞凋亡。 Belinostat 在体外抑制多种人类肿瘤细胞系的生长，通过克隆形成测定确定的 IC₅₀ 范围为 0.2-3.4 μM^[1]。 Belinostat (PXD101) 是一种有效的组蛋白脱乙酰酶 (HDAC) 抑制剂，可有效抑制纯化的重组 HDAC6 的酶活性（IC₅₀ 为 82 nM）^[2]。

体内：每天用 Belinostat（10-40 mg/kg/天 ip）处理携带人卵巢和结肠肿瘤异种移植物的裸鼠，持续 7 天，导致显着的剂量依赖性生长延迟，对小鼠没有明显的毒性迹象。顺铂耐药卵巢肿瘤细胞的异种移植物也观察到生长延迟。在用 Belinostat (PXD101) 处理 3 小时后，在小鼠的血液和肿瘤中检测到 H4 乙酰化的显着增加。抑制小鼠体内人肿瘤异种移植物的生长，无明显毒性^[1]。 Belinostat (PXD101) 显示出对人 A2780 卵巢癌皮下异种移植物的单药抗肿瘤活性，该活性通过与卡铂联合治疗得到增强^[2]。

激酶试验：对于活性测定，反应在总体积为 150 μL 的缓冲液 [60 mM Tris (pH 7.4)，含有 30% 甘油] 中进行，其中含有 2 μL 细胞提取物和（如果使用）2 μL Belinostat。通过添加 2 μL [3H] 标记底物（对应于 20 个 NH2 末端残基的乙酰化组蛋白 H4 肽）开始反应。样品在 37°C 下孵育 45 分钟，并通过添加 HCl 和乙酸（终浓度分别为 0.72 和 0.12 M）终止反应。将释放的[3H]乙酸盐提取到750 μL 乙酸乙酯中，并将样品在12,000×g下离心5分钟。将上相 (600 μL) 转移至 3 mL 闪烁液中并计数 [1]。

细胞试验：人卵巢细胞系 A2780 和顺铂 (A2780/cp70) 和阿霉素 (2780AD) 抗性衍生物在补充有谷氨酰胺 (2 mM) 和 FCS (10%) 的 RPMI 1640 中生长。人结肠（HCT116 和 HT29）、黑色素瘤（HS852）、前列腺（PC3）、肺（CALU-3）和乳腺（MCF7）细胞系在 RPMI 1640 中生长，其余细胞系在如上所述补充的 DMEM 中生长。人非小细胞肺癌细胞系WIL在如上补充的DMEM中生长。药物敏感性通过克隆形成测定来确定。简而言之，将细胞以 8×104 个细胞/25 cm2 烧瓶的密度铺在 5 mL 培养基中，并使其贴壁生长 48 小时。将细胞暴露于贝利诺他（0.016 至 10 μM 的五种浓度）24 小时。除去培养基，并向每个烧瓶中添加 1 mL 胰蛋白酶/EDTA。一旦细胞脱离，添加 1 mL 培养基，重新悬浮细胞，并对来自对照未处理烧瓶的细胞进行计数。将细胞稀释并以 500-2000 个细胞/培养皿的密度接种到 6 厘米培养皿中（每个烧瓶三个），具体取决于细胞系。与对照烧瓶一样，对药物处理烧瓶中的细胞进行稀释和铺板。培养皿在 37°C 下孵育 10-15 天。用 PBS 洗涤细胞，在甲醇中固定，并用结晶紫染色，并对含有 ≥ 50 个细胞的集落进行计数。灵敏度以 IC50（三个实验的平均值±SE）表示，定义为将集落数量减少至对照未处理细胞的 50% 所需的药物浓度[1]。

动物体内实验:小鼠[1] 对于人类肿瘤异种移植物研究，用胰蛋白酶/EDTA（PBS 中 0.25%/1 mM）收获单层培养物并重悬于 PBS 中。将约 107 个细胞皮下注射到无胸腺裸鼠（CD1 nu/nu 小鼠）的右侧腹。 10-15天后，当平均肿瘤直径≥0.5cm时，将动物随机分成六组进行实验。将贝利司他溶解在 DMSO 中，然后用水稀释，使 DMSO 终浓度为 10%，并在指定时间腹膜内给药。该配方对于 ≤ 40 mg/kg 的剂量提供足够的溶解度。每天对小鼠进行称重，并通过假设球形几何形状的卡尺测量来估计肿瘤体积（体积=d3×π/6）。

研究领域：Cell Cycle/DNA Damage | Epigenetics | Autophagy

作用靶点：HDAC | Autophagy

参考文献：[1]. Plumb JA, et al. Pharmacodynamic response and inhibition of growth of human tumor xenografts by the novel histonedeacetylase inhibitor PXD101. Mol Cancer Ther. 2003 Aug;2(8):721-8.

[2]. Qian X, et al. Activity of PXD101, a histone deacetylase inhibitor, in preclinical ovarian cancer studies. Mol Cancer Ther. 2006 Aug;5(8):2086-95.

[3]. Chia S, et al. Phenotype-driven precision oncology as a guide for clinical decisions one patient at a time. Nat Commun. 2017 Sep 5;8(1):435.