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DAPT (GSI-IX) 是一种有效的口服活性 γ-分泌酶抑制剂 |MCE

已有 593 次阅读 2024-9-13 17:44 |系统分类:科研笔记

MCE 国际站：DAPT

CAS：208255-80-5

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：DAPT (GSI-IX) 是一种有效的口服活性 γ-分泌酶 抑制剂，IC₅₀ 分别为 115 nM 和 200 nM，总 < b>淀粉样蛋白-β (Aβ) 和 Aβ₄₂，分别为。 DAPT 抑制 Notch 1 信号的激活并诱导细胞分化。 DAPT 还诱导自噬和细胞凋亡。 DAPT 具有神经保护活性，具有治疗自身免疫性疾病和淋巴增生性疾病、退行性疾病和癌症的潜力^[1]^[2]。 IC50 和目标：IC50：115 nM (Aβ)，200 nM (Aβ42)^[5]

体外：DAPT 抑制 Aβ 的产生超过 90%，仅适度降低培养基中的 APPβ。尽管 DAPT 处理后 APPβ 减少了约 30%，但这种作用不依赖于浓度，并且可以通过去除 DAPT^[1] 来逆转。DAPT 的浓度（0、25、50 和 75 μM）和 γ-分泌酶产生的 Notch 1 片段 Val1744-NICD 在 48 小时后以剂量依赖性方式降低（P <0.01）。在 50 μM^[3] 浓度下，γ-分泌酶的激活几乎完全被 DAPT 抑制。

体内：将 DAPT 施用于 PDAPP 小鼠 (100 mg/kg sc)，并检查大脑皮层中的 DAPT 和 Aβ 水平。处理后 3 小时大脑中达到 490 ng/g 的峰值 DAPT 水平，并且在前 18 小时内持续超过 100 ng/g（~200 nM）的水平。这些 DAPT 的脑浓度超过了其降低神经元培养物中 Aβ 的 IC₅₀ (115 nM)，并产生了稳健和持续的药效学效应^[1]。DAPT通过下调大鼠Notch 1和核因子kappa B的表达来保护大脑免受脑缺血。 Western blot 分析还显示，DAPT（0.03 mg/kg）组 Notch 1 和 NF-κB 表达显着降低（P<0.05 vs. MCAO 组）^[2]。

细胞试验：用 APP751 (HEK 293) 基因转染的人胚胎肾细胞用于常规 Aβ 还原测定。将细胞铺在 96 孔板中，并在补充有 10% 热灭活胎牛血清的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基 (DMEM) 中粘附过夜。将细胞在 37°C 下用 DAPT（0、0.4、2、10、50 和 250 nM）预处理 2 小时，吸出培养基并应用新鲜的化合物溶液。再经过 2 小时处理后，取出条件培养基并通过总 Aβ 特异性的夹心 ELISA (266-3D6) 进行分析。相对于用 0.1% DMSO 处理的对照细胞测量 Aβ 产生的减少，并表示为抑制百分比。使用 XLfit 软件将至少六剂重复的数据拟合到四参数逻辑模型，以确定效力[1]。

动物体内实验:小鼠[1] 过度表达淀粉样前体蛋白 APPV717F 突变体的三至四个月大的杂合 PDAPP 转基因小鼠。每个治疗组（n = 10）由相同数量的年龄匹配的雄性和雌性动物组成，这些动物在治疗前禁食过夜。治疗组和对照组均以 10 mL/kg 的体积与 DAPT 或单独的载体一起给药。对组织进行处理并进行所有 Aβ 和 APP 测量。取出大脑后，将一侧半球的皮质均质化、离心，并将上清液用于 Aβ 测量。另一个半球的皮层被快速冷冻以分析化合物水平。 Aβ 水平表示为 ng/g 湿组织重量，并相对于媒介物处理的对照动物组织的平均 Aβ 水平计算减少百分比。使用曼-惠特尼非参数统计分析数据以评估显着性。大鼠[3]使用雄性Sprague-Dawley大鼠(260-290g)。 MCAO 后立即将 DAPT 溶液立体定向注射至侧脑室 (LV)。左心室的立体定向注射在距前囟的坐标-0.8毫米前后、±1.5毫米中外侧和-4.5毫米背腹处进行。将30只大鼠随机分为3个手术组（每组10只）：假手术组给予等体积PBS，不进行MCAO手术； MCAO后接受等体积PBS的MCAO组(MCAO)；和 DAPT 组，在 MCAO 后接受 DAPT 0.03 mg/kg。术后24小时评估第一次神经功能，然后术后48小时评估第二次神经功能。同时，测量并比较不同组间的脑含水量和梗塞体积。

研究领域：Neuronal Signaling | Stem Cell/Wnt | Autophagy | Apoptosis

参考文献：[1]. Dovey HF, et al. Functional gamma-secretase inhibitors reduce beta-amyloid peptide levels in brain. J Neurochem. 2001 Jan;76(1):173-81.

[2]. Zhou JX, et al. γ-secretase inhibition combined with NSC 119875 enhances apoptosis of nasopharyngeal carcinoma cells.Exp Ther Med. 2012 Feb;3(2):357-361.

[3]. Li S, et al. DAPT protects brain against cerebral ischemia by down-regulating the expression of Notch 1 and nuclear factor κB in rats. Neurol Sci. 2012 Dec;33(6):1257-64.

[4]. Tanimizu N, et al. Intrahepatic bile ducts are developed through formation of homogeneous continuous luminal network and its dynamic rearrangement in mice. Hepatology. 2016 Jul;64(1):175-88.

[5]. Michael T. Chang, et al. Notch Drives Proliferation And Radiation Resistance Of Cancer Stem Cells In Adenoid Cystic Carcinoma. Yale University. January 2016.

[6]. Majumder S, et al. Shifts in podocyte histone H3K27me3 regulate mouse and human glomerular disease. J Clin Invest. 2018 Jan 2;128(1):483-499.

[7]. Yixin Tao, et al. β-catenin activation in hair follicle dermal stem cells induces ectopic hair outgrowth and skin fibrosis. J Mol Cell Biol. 2018 May 16.