stqs0428的个人博客分享 http://blog.sciencenet.cn/u/stqs0428

博文

磁珠预处理和实验方法 - MedChemExpress

已有 2216 次阅读 2022-5-12 21:27 |系统分类:科研笔记

磁珠的优势

蛋白荷载量高
特异性强、非特异性结合性低
样品损失小
操作方便

 

如何操作

磁珠预处理

 

将磁珠充分混悬,取 25-50 μL 磁珠,置于 1.5 mL EP 管中,加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液,充分混悬置于磁力架磁性分离弃上清;重复以上洗涤步骤 2 次。

实验方法

 

Step 1. 裂解细胞并准备用于免疫沉淀的样品。

 

Step 2. 预处理样品:通过将裂解样品单独与珠子或与无关抗体结合,以除去能与 IP 组分非特异性结合的任何蛋白质。

 

Step 3. 使用针对目的蛋白的抗体孵育溶液,用直接法或用间接法将抗体固定在磁珠上。继续孵育,以形成抗体-目的蛋白复合物。

 

Step 4. 沉淀微珠-抗体-目的蛋白复合物,去除上清液。

 

A/G 磁珠的 IP 实验

Step 5. 洗涤沉淀的复合物数次。使用磁珠时,每次洗涤置于磁性分离架上即可除去上清液。最后一次洗涤后,需要除去尽可能多的上清液。

 

Step 6. 使用低 pH 或 SDS 样品上样缓冲液从磁珠上洗脱蛋白质。

 

Step 7. 分析目的蛋白或蛋白复合物:十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE),染色,质谱,Western Blotting 等。

 

注:具体操作细节,还需仔细阅读对应产品说明书

MCE 磁珠产品

 

MCE 磁珠产品

HY-K0202  Protein A/G Magnetic Beads

25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液
IP/Co-IP/ChIP

HY-K0203   Protein A Magnetic Beads

25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液
IP/Co-IP/ChIP

HY-K0204   Protein G Magnetic Beads

25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液
IP/Co-IP/ChIP

HY-K0201   Anti-HA Magnetic Beads

10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液

IP/Co-IP/蛋白纯化

HY-K0206   Anti-c-Myc Magnetic Beads

10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液

IP/Co-IP/蛋白纯化

HY-K0207   Anti-Flag Magnetic Beads

10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液

IP/Co-IP/蛋白纯化

HY-K0208   Streptavidin Magnetic Beads

每次结合使用 100 μL 磁珠

IP/Co-IP/ChIP/细胞分选/蛋白纯化/核酸杂交

 

MCE 多功能磁力架——磁珠完美搭档

 

 

MCE 磁力架产品是磁珠专用配套设备,支持 MCE 全线磁珠类产品:


优雅外观
强磁磁芯
优化设计:“三明治”孔板
兼容
:200 μL-2 mL-15 mL

 

客户验证

HY-K0201 Anti-HA Magnetic beads

HY-K0208 Streptavidin Magnetic Beads

 




https://blog.sciencenet.cn/blog-3506747-1338274.html

上一篇:LYTAC 与靶向蛋白降解技术 - MedChemExpress
下一篇:[转载]淀粉样蛋白沉积或是阿尔茨海默症发展“驱动者”-MCE
收藏 IP: 101.93.204.*| 热度|

0

该博文允许注册用户评论 请点击登录 评论 (0 个评论)

数据加载中...

Archiver|手机版|科学网 ( 京ICP备07017567号-12 )

GMT+8, 2024-8-4 16:12

Powered by ScienceNet.cn

Copyright © 2007- 中国科学报社

返回顶部