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FlowJo分析调节性T细胞
作者:胡金涛
调节性T细胞(Treg)是抑制性T细胞内的一种功能亚群。Treg细胞是一群表达特征为CD4+CD25+Foxp3+的T淋巴细胞。Treg细胞来源于胸腺,占外周血CD4+T细胞的2%-10%。根据Treg的来源不同可以分为自然调节性T细胞(nTreg)和诱导产生的适应性调节T细胞(a Treg)两类。Treg细胞可以抑制T细胞增殖和分泌细胞因子,在防止发生自身免疫、控制肿瘤免疫和移植耐受方面发挥重要作用。Treg细胞缺陷或功能受损会引发很多自身免疫病,而Treg细胞增多则会抑制机体对病原体的免疫应答反应,因此,Treg细胞是一群重要的免疫调节细胞,在调节机体免疫应答中起着不可或缺的作用。
一、 FlowJo分析Treg细胞数据的过程
1. 把Treg细胞样品的原始数据拖入FlowJo软件,双击打开原始数据。如(图一)所示:
(图一)
X轴选择FSC,Y轴选择SSC。分析的细胞选择上图所示的淋巴细胞群进行分析。
2. 在SSC/FSC图中双击淋巴细胞群,
(图二)
X轴选择FITC-CD4, Y轴选择SSC,圈出CD4+的细胞。如(图二)所示:
3. 在FITC-CD4/FSC图中双击CD4+的细胞群,
(图三)
X轴选择PE-CD25, Y轴选择APC-Foxp3, 用四分门设门工具 设门。如(图三)所示。
二、Treg细胞结果分析
1. 结果分析的原则:检测Treg细胞一般采用三标记染色法。本实验中荧光抗体搭配如下:(CD4-FITC/CD25-PE/ Foxp3-APC)。Treg细胞来源于CD4+的细胞,分析时首先要圈出CD4+的细胞,在CD4+的细胞中分析双阳性细胞(CD25+ Foxp3+),从而实现分析Treg细胞(CD4+CD25+Foxp3+)。
2. 图三中Q2区域的细胞即为Treg细胞(CD4+CD25+Foxp3+),检测的结果:8.62%。可以根据检测结果判断Treg细胞在调节机体免疫应答中的作用。
三、 Treg细胞结果输出
分析结果的输出根据最终的需求可以有多种输出方式
1. 在细胞周期分析窗口工具栏中选择“文件”并单击,选择下拉菜单中的“另存为”,选择保存位置、重新命名文件名以及文件保存的文件类型(SVG、PNG、EMF、JPG)。
2. 把上述样品的分析应用到组中,在Flow Jo软件界面中单击打开布局编辑器,在工作台的样品空间把“淋巴细胞结点和CD4+细胞结点”拖入布局编辑器中,单击布局编辑器右上角的Batch工具。输出整个实验组的数据。如(图四)所示:
(图四)
此博文中的原始FCS数据:原始FCS数据.zip
下载FlowJo分析数据:www.flowjochina.com
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