为了确定 ARNTL 通路是否也在体内调节肿瘤对铁死亡激活剂的敏感性，将 ARNTL、EGLN2 和 HIF1A 敲低的 HT1080 细胞皮下接种到免疫缺陷小鼠的右侧。从第 7 天开始，用 (1S,3R)-RSL3（一种适合体内实验的代谢稳定的 RSL3 衍生物）对这些小鼠进行全身治疗 2 周。与对照 shRNA 组相比，RSL3 治疗有效地减少了携带 ARNTL 或 HIF1A 敲低细胞的小鼠中形成的肿瘤大小。相比之下，具有 EGLN2 敲低细胞的小鼠对 RSL3 治疗具有抗性。对 PTGS2（前列腺素-内过氧化物合酶 2）表达的 qPCR 分析，一种用于评估体内铁死亡和 MDA 定量的标志物，表明 ARNTL 和 HIF1A 敲低增加，而EGLN2 敲低可抑制体内铁死亡。相反，在这些基因缺陷肿瘤中，RSL3 没有改变 CASP3（半胱天冬酶 3；细胞凋亡的标志物）活性（细胞凋亡的标志物）。值得注意的是，在 RSL3 治疗后，ARNTL 和 HIF1A 敲低的 HT1080 肿瘤中脂滴的形成和 FABP3和 FABP7的 mRNA 表达降低。相反，它们在 EGLN2 敲低的 HT1080 细胞中基本不受影响。