广谱丽沙病毒疫苗的研制（最新进展）(3)

Toward the Development of a Pan-Lyssavirus Vaccine

前记 

    目前丽沙病毒属的病毒，即（经典）狂犬病毒和狂犬病毒相关病毒，总共发现有大约18种，可细分为三个系统群（phylogroups）。现有狂犬病毒疫苗是用（经典）狂犬病毒（RABV）制备的，只能针对系统群１的病毒提供较好的免疫保护作用，而对系统群2和3的病毒则效果可能不佳。为了确保人类完全免除所有类型狂犬病毒的危害，有必要开发广谱狂犬病疫苗，能针对各种类型的狂犬病毒都发挥免疫保护作用。由于基因１型狂犬病毒（RABV）以外的17种丽沙病毒绝大多数都以蝙蝠为宿主，目前已知它们对人的危害很罕见，所以长期以来对此类疫苗研发的需求和动力不足，因而经费来源有限，进展缓慢。美国宾州费城的杰弗逊大学和美国ＣＤＣ的研究人员曾合作在广谱狂犬病毒疫苗研究方面取得重要进展，他们的研究论文于2020年7月21日发表在《Cell Reports （细胞报告）》杂志上，本博客当年曾作过介绍（见相关博文）。

美国费城杰弗逊大学的研究人员在本月10日的《Viruses（病毒）》杂志上又发表论文介绍他们在此项研究中的最新进展。现将这篇新论文的主要内容进行摘译（因内容较多，分数次发布）。 

4. 讨论（2）

在我们的研究中，我们证明了RABV- cAS1 能够产生针对系统群I中两种不同病毒(RABV和IRKV)的中和抗体，而且没有显著差异。通过我们的新方法，这似乎是对嵌合LyssaVax疫苗的重大改进，因为Fisher等人先前发表的尝试表明，在有佐剂和没有佐剂的情况下，LyssaVax丧失了针对IRKV产生VNA的刺激作用[26]。这可能与用于创建嵌合G的设计有关，其中RABVG的抗原位点的更多抗原部分被牺牲。值得注意的是，参与保护的抗原位点并不一定对所有的丽沙病毒都相同。RABV疫苗在系统群I内可出现交叉保护；然而，保护水平是不明确的，可能取决于高水平的 G特异性抗体[46 - 48]。我们的发现与其他研究结果一致，表明现有狂犬病疫苗对IRKV的保护作用最小[48,49]。这种有限的保护最可能的解释是系统群I丽沙病毒内部的抗原变异，因为IRKV与欧洲蝙蝠丽沙病毒和杜文海格（Duvenhage）病毒的关系比与狂犬病毒（RABV）的关系更密切[1,50]。RABV与IRKV的比较表明，抗原位点 I、II和 III 不同，而抗原位点 IV 则完全保守[49,51]。

虽然本文的交叉保护评价仅限于IRKV，但与其他蝙蝠相关的丽沙病毒相比，该丽沙病毒在各种研究中显示出最高的致病性，这解释了为什么现有的基于 RABV的生物制剂对IRKV的攻击只具有部分保护作用[49,51]。此外，在祖先水平上，IRKV、RABV、ABLV、ARAV、BBLV、KHUV、DUVV、EBLV-1和EBLV-2病毒都被归类为一组（系统群I），这表明这些病毒之间应该存在血清学交叉反应[24,50]。其他研究将系统群I分为两个主要世系（lineages）:一个包括IRKV、EBLV-1和DUVV，另一个世系包括古北区（Palearctic）(ARAV、BBLV、KHUV和EBLV-2)、澳大利亚(ABLV)、东方(GBLV)和美洲(RABV)丽沙病毒物种[52]。

有趣的是，用RABV-cAS1疫苗免疫的小鼠对wt（野生型）IRKV具有完全的保护作用，而用RABV疫苗免疫的小鼠的保护作用有限。一方面，AS1含有一个具有关键残基LCGV的线性表位，负责CR57和62071-3 mAbs的结合。IRKV AS1与RABV AS1的比对显示IRKV丢失了V230。这种氨基酸变化可能改变单克隆抗体在该线性表位内的结合，扰乱中和作用并限制针对IRKV的保护。最近的研究支持了我们的发现，表明RABV疫苗在动物模型中对IRKV并不完全有效[49,51]。与RABV相比，AS1如何提高针对IRKV的保护尚不清楚。RABV、IRKV和MOKV AS1的计算机分析表明，IRKV AS1与RABV AS1的同源性为64.5%，而与MOKV AS1的同源性为61.3%。然而，IRKV AS1有两个残基R245和D247与MOKV AS1共享，而与RABV-cAS1不共享(补充图S3)。为了证实这一点，未来对这两个残基的分析可能会更好地理解通过MOKV AS1获得的保护。

我们的研究结果强调，虽然MOKV免疫的小鼠得到了充分的保护，但RABV-cAS1疫苗可提供40%的保护，比狂犬病疫苗有显著提高，而狂犬病疫苗对MOKV没有保护作用。这些发现与先前的研究一致，证实RABV疫苗不能针对系统群II的丽沙病毒提供保护[24,25,53]。虽然对wt MOKV的保护只是部分的，但我们认为这与疫苗接种程序无关。需要强调的是，RABV-cASI疫苗的灭活和佐剂添加，采用的是5µg的TLR-4激动剂合成的单磷酰脂质A (Monophosphoryl Lipid A，MPLA)，3D (6A)-PHAD (PHAD)，制备成含2%角鲨烯（squalene）的油乳剂(SE)。最近对狂犬病载体疫苗的研究表明，使用PHAD-SE作佐剂的灭活疫苗明显改善了疫苗引起的免疫应答[32-34]。

（未完待续）

参考文献：

Ben Hamed, S.; et al.，Toward the Development of a Pan-Lyssavirus Vaccine. Viruses 2024, 16, 1107.  https://doi.org/10.3390/v16071107 

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