口服狂犬病疫苗（ORV)

在泰国流浪犬中的应用试验取得可喜成果

泰国和德国的研究人员于今年3月29日在专业杂志《 Viruses（病毒）》上发表论文（见参考文献），报告了他们在泰国的流浪狗中采用德国研发和生产的口服狂犬病疫苗（ORV)进行的可行性和有效性研究。以下简介他们的研究成果。

1.　前言

超过95%的人类狂犬病病例是由受感染的家犬咬伤而引发。因此，消除狗介导的人类狂犬病可能对减少狂犬病的疾病负担作出重大贡献。实现这一目标的唯一最具成本效益的方法是通过犬类疫苗接种从源头消除狂犬病。大规模犬类疫苗接种(Mass Dog Vaccination，MDV)运动可以提供群体免疫，并成功地阻断狂犬病在这个宿主物种中的传播循环。该方法已在全球许多国家成功采用。

2.　泰国在消除狂犬病方面的进展

泰国在消除狂犬病方面已取得重大进展，人类狂犬病病例从1980年代初的每年200－300例减少到2019年的3例。动物狂犬病也经历了同样的发展趋势，从1997年至2000年期间的每年3千－4千确诊病例大幅减少到2019年的380例。然而，控制和消除犬只中最后残留的狂犬病疫源地比预期的要困难得多。因此，消除狗狂犬病的目标已经被多次调整。2019年，泰国报告87%的动物狂犬病发生在狗身上。这些狗大多是没有主人或有主人的流浪狗，从来没有接种过狂犬病疫苗。在泰国，大多数流浪狗都是由社区里的人(狗看护者)喂养和照顾的，但这些看护者捕捉或控制这些狗的能力有限。因此，在每年4月至6月期间开展的大规模犬类疫苗接种(MDV)运动中，这些犬类通常不能通过更标准的方法即注射法进行疫苗接种。注射接种方法通常采用挨家挨户的上门接种或到专门的疫苗中心集中进行接种，具体采用哪种方式取决于当地相关负责当局的偏好

3.　研究设计的３个阶段

野生动物口服疫苗已成功用于控制世界各地不同野生动物的狂犬病，也有人建议对无法用注射方法进行疫苗接种的犬只进行口服疫苗接种。本项目研究了在泰国使用针对流浪犬的口服狂犬病疫苗(ORV)作为控制狂犬病的补充工具的可行性和现场效果。研究设计分为3个阶段。

第一阶段是为泰国的目标犬群确定最合适的诱饵，该诱饵被广泛接受，并有助于在口腔中释放疫苗。第二阶段，候选疫苗不仅必须满足世界动物卫生组织(OIE)规定的最低安全要求，而且还必须在食用单一诱饵后诱导足够的免疫反应。最后，如世界卫生组织(WHO)所建议的，口服狂犬病疫苗(ORV)的可行性需要在各种地方环境的现场试验期间进行评估。

第一阶段的诱饵接受研究表明，通过提供蛋黄味或烹煮香肠味的诱饵，可以吸引到很大一部分的流浪犬群体，而蛋黄味的诱饵更适合在口腔中释放疫苗。第二阶段的血清学研究表明，选择的候选疫苗SPBN GASGAS，在当地犬口服后可诱导持续和可检测到的免疫反应，与接受市售的注射式疫苗的犬相当。

本文给出了第三阶段研究的结果，即可行性和有效性研究的结果。主要目的是确定狗的ORV作为注射方式的疫苗接种的补充工具的好处，并通过识别该方法在当地环境下的MDV（大规模犬类疫苗接种）运动中整合可能的约束条件和解决方案，优化该方法在流浪狗中的应用。

4.　实验方法和使用的ORV

根据之前的血清学研究，使用德国生产的SPBN GASGAS疫苗（ORV）进行了现场研究。第三代疫苗病毒SPBN GASGAS是第一代口服狂犬病毒疫苗(ORV)SAD B19的cDNA克隆SAD L16的基因工程衍生物。SPBN GASGAS缺乏假基因ψ，出于安全目的，它的狂犬病毒糖蛋白第333位和第194位的氨基酸编码分别设计为谷氨酸和丝氨酸。该糖蛋白在第333位的修饰消除了成年小鼠脑内接种SAD B19后的残留致病性，在第194位的修饰避免了潜在的代偿突变，即不会引起原始残留致病性的恢复。对这两个位置的所有三个编码核苷酸都作了改变，以降低回复到原始形式的风险。此外，还额外又重复插入了一个具有相同改变的糖蛋白基因，可以确保进一步提高疫苗病毒的安全性。

将含疫苗病毒的液体(3ml, 108.2 FFU/mL)装满小囊，然后与两种不同的诱饵(一种工业制造的鸡蛋味诱饵－蛋饵，和一种本地生产的肠饵)混合，这两种诱饵以前在泰国被证明是容易被当地流浪狗接受的。研究小组观察到蛋诱饵的接纳程度还可以进一步优化提升,当地市场上常见的金枪鱼味或鸡肝味的给猫吃的液体零食可以直接用作狗的诱饵(强蛋味诱饵)。

在泰国4个省的5个研究区域对犬的ORV进行了检测。在这些地区，在当地市政工作人员和养狗人的支持下，确定了有流浪狗的地点。ORV小组访问了五个研究区域中的每一个，并以三种诱饵形式分发ORV(SPBN GASGAS)，这些疫苗采用分发和回收模式提供给狗。测试的三种诱饵类型包括鸡蛋味诱饵、用市面上可买到的猫液体零食作的的强蛋味诱饵和烹煮香肠诱饵。接受疫苗诱饵的狗被认为接种了疫苗，如果丢弃的疫苗包被咬穿孔，或如果狗在吞下疫苗诱饵(包括疫苗包)之前咀嚼疫苗诱饵至少5次，也被认为接种了疫苗。

5.　结果:

在338个地点共确认有2,444只无法用注射方法接种疫苗的流浪犬。由于不是所有的狗都可以接近，实际结果是对79.0%的狗提供了诱饵；在这些狗中，91.6%接受了诱饵，随后有83.0%经鉴定被认为接种成功。

 总的来说，在这些地点的流浪犬中，65.6%通过口服途径成功接种了疫苗。如此显著地增加流浪犬的疫苗接种覆盖率可阻断狂犬病传播循环，并为实现到2030年在泰国消除犬类介导的人类狂犬病的目标提供了独特的机会。

　　　6.　结论

在泰国进行的首次大规模现场研究表明，狗的ORV可以显著提高被认为无法采用注射方法进行疫苗接种的流浪狗的疫苗接种覆盖率。在这些现场研究中建立的方案显示了将狗的ORV整合到现有犬狂犬病控制项目中的潜力。为了达到目标免疫水平，流浪犬的可接近性是至关重要的。这只有通过地方当局、社区成员和狗看守人的合作和直接参与才能实现。因此，在实施这项运动之前，需要确保他们的支持。本文的研究结果表明，在未来几年，特别是在泰国有残留狂犬病疫源地的地区，对流浪犬使用ORV可能有助于实现全国消除犬介导狂犬病的目标。这种方法也可能推广到亚洲和非洲需要全面消除犬介导狂犬病的其他国家或地区。

参考文献：

Chanachai, K.; Wongphruksasoong, V.; Vos, A.;et al., Feasibility and Effectiveness Studies with Oral Vaccination of Free-Roaming Dogs against Rabies in Thailand. Viruses 2021, 13, 571. https://doi.org/10.3390/v13040571