南非的Nel等曾与英国和德国的相关研究人员合作，对2013年以前获得的所有20多个莫科拉病毒（MOKV）样品进行全面梳理，并对其中的18个样品进行了较系统全面的分析和研究，于2013年发表了相关研究论文（参见：最可怕的狂犬病毒－莫科拉病毒的多样性和流行病学 2019-08-17）。

Nel等于2017年再次发表研究论文，报告他们在2012年和2014年从南非的家猫中分离到的3种新的MOKV。

以下介绍他们于2017年发表的相关论文的主要内容。

论文题目：来自南非的狂犬病相关莫科拉病毒的新分离株

（New isolations of the rabies-related Mokola virus from South Africa）

发表的杂志：BMC Veterinary Research (2017) 13:37 　

　　　　　（ DOI： 10.1186/s12917-017-0948-0） 

摘要

背景：Mokola病毒(MOKV)是一种与狂犬病相关的丽沙病毒，似乎只存在于非洲大陆。自1968年确认MOKV以来，总共只报告了24例MOKV，其中包括2例人类病例。MOKV有一个未知的储存宿主，目前的市售狂犬病疫苗不能提供针对MOKV的保护。

结果：我们从南非的家猫中分离到了三种新的MOKV。其中包括回顾性鉴定的2012年的2例和2014年的1例。

结论：这些病例充分说明，对与狂犬病相关的丽沙病毒的监测普遍还很欠缺，我们对莫科拉丽沙病毒本身的流行病学和生态学认识不足。

关键词：莫科拉病毒，丽沙病毒，狂犬病相关，南非

背景

丽沙病毒属目前由14种已知的病毒组成，它们都能导致狂犬病，一种致命的脑病。该属的原型病毒是经典狂犬病毒(RABV)，其余被称为狂犬病相关的丽沙病毒。Mokola病毒(MOKV)是一种与狂犬病相关的丽沙病毒，于20世纪60年代末首次从尼日利亚Mokola森林的鼩鼱中分离出来。此后不久，MOKV被报道为尼日利亚两名儿童神经系统疾病的病原体。

然而，由于种种原因，对这些早期报告仍然存在争议。1968年，该病毒第一次从一名3岁半女孩的脑脊液中分离出来。该女童痊愈后没有任何神经后遗症，也没有检测到病毒中和抗体(VNAs)。

这是出乎意外的，因为病人能幸存于狂犬病是非常罕见的。在大多数幸存者病例中，患者有中度至重度的神经后遗症，病毒中和抗体(VNAs)被认为是病毒被清除的主要机制。第二份人类分离物是1971年从一名6岁女童的脑组织中提取的，该女童死于疑似脑膜炎或脑炎。在这两例人类病例中，经典狂犬病病毒(RABV)感染的临床症状均不典型。值得怀疑的是，这些分离株是否仍然保存完好，也没有相关遗传信息可资利用。

截止至2013年，已知存在于各种哺乳动物宿主中的MOKV，只有18株被证实，宿主动物包括鼩鼱、猫、狗和啮齿类动物(Lophuromys sikapusi)。MOKV在南非最初是于1970年被发现，是从一只家猫身上分离出来的。1981年，在津巴布韦从接种过疫苗的猫和狗身上分离出MOKV病毒，很明显，现有的狂犬疫苗并没有提供针对MOKV的保护。MOKV似乎是非洲大陆独有的，在过去20年里，所有的分离物都是在南非获得的。

对这种丽沙病毒的流行病学了解甚少，在整个非洲大陆因未能确定其储存宿主和只有有限的监测，使问题更加复杂化。在非洲只有在极少数情况下才有条件进行狂犬病诊断，通常也只能使用荧光抗体试验(FAT)。FAT依赖于一种多克隆荧光素异硫氰酸酯偶联抗丽沙病毒球蛋白，该试剂能够检测所有已知的丽沙病毒，但不能区分它们。

因此，FAT阳性病例可确定为狂犬病，但实际的致病丽沙病毒种类却很少能被确定。在经常对FAT阳性样本进行分子特征分析的南非，大多数MOKV分离株来自KZN省(n=4)和东开普省(EC) (n=5)，有一株分离株来自Mpumalanga省。这些分离株在核蛋白(N)基因的核苷酸和氨基酸水平上分别有0％－ 5.7%到0％－ 2%的差异。然而，比较所有已知MOKV分离株的Ｎ基因，发现其核苷酸和氨基酸水平的差异分别高达15%和6.4%。

当前使用的狂犬病毒(RABV)疫苗不能预防MOKV感染。应该认识到家养猫是最常见的MOKV感染的宿主物种。猫和它们的主人之间频繁的接触提示存在潜在的感染人类的风险。考虑到这种情况，很明显，更好地了解MOKV的发病率和生态学是至关重要的。

在此，我们报告了从南非KZN省的猫身上分离到的三种MOKV病毒，并对其进行了鉴定。第一例于2014年1月确诊，随后对选定的样本进行了小规模回顾性研究，确定了2012年的另外两例。

方法

2014年1月，在南非KZN省彼得马里茨堡，一名私人兽医向艾尔勒顿省兽医实验室提交了一只疑似死于狂犬病的家猫的脑材料(实验室编号:14/024)。

荧光抗体试验(FAT)观察到丽沙病毒抗原，但在本例中染色为暗淡荧光，明显地是不典型的狂犬病病毒阳性标本。这种不典型的染色以前在MOKV感染中曾被注意到，这促使了对该病例的进一步调查。在南非的OIE（世界动物卫生组织）狂犬病参考实验室证实了FAT阳性结果，并在比勒陀利亚大学对样品进行了遗传特征鉴定。

在随后将样本14/024鉴定为MOKV之后，决定对来自KZN省各地的家畜的其他FAT阳性狂犬病样本进行调查和分子特征分析。所选的归档样本(n=36)通过核苷酸测序进行了鉴定，从而确定了另外两例MOKV病例。

(具体实验检测方法略。)

结果

对36个样本进行了部分N-基因序列测定。基于部分N基因序列，除了３个 MOKV病例外，其余33个样本都属于经典狂犬病毒RABV的犬科动物变种。贝叶斯分析表明，所有新的RABV的序列都可与同一时间段的其他RABV序列归类为一组。

在所有MOKV病例中，确定了四个结构基因(N-、P-、M-和Ｇ -基因)的完整编码区域序列。使用贝叶斯分析所观察到的树形拓扑结构都很相似，与用于分析的基因无关（Ｍ基因除外）。

对于M-基因数据集的比较分析支持了先前的研究结果，即MOKV的系统发生受地理来源的强烈影响。对于来自南非的分离株，发现两个单独的簇群分别代表来自两个省的分离株，即KZN省和EC省。在KZN簇群内，新的MOKV分离株形成了一个新支系。所有已知MOKV分离株的N-、P-、M-和Ｇ基因的核苷酸差异范围分别为0.1％-13.9%、0％-25.2%、0％-17.8%和0.2％-19.6%。

讨论

在非洲没有对与狂犬病有关的丽沙病毒进行主动监测，因此这些病毒的流行病学仍然不清楚。由RABV引起的狂犬病在南非KZN省流行，并已通过大规模接种疫苗运动使问题基本得到解决。因此，由于提高了对狂犬病的认识，每年疑似和确诊的犬类狂犬病病例数有所下降。这进而导致兽医实验室和兽医发现了表现出狂犬病症状的动物的异常病例。估计今后可能出现更多与狂犬病相关的丽沙病毒病例(和分离株)，就像这里描述的病例一样。鉴定由狂犬病相关病毒引起的感染是很重要的，任何补充信息都可能增进我们对这些病毒流行病学的了解。然而，目前推荐的诊断狂犬病的技术－FAT，不能区分丽沙病毒属中的不同病毒种类。

荧光素异硫氰酸酯偶联的广谱多克隆抗丽沙病毒球蛋白，能够检测所有的丽沙病毒种类，正在开展狂犬病实验室诊断的国家中使用。在一些MOKV病例中，观察到不典型染色，即包含体染色强度小于狂犬病毒通常所见。MOKV感染的确认引发了一项小型回顾性研究，以确定是否忽略了其他MOKV病例，这些病例没有产生FAT的典型染色。随后，对在7年内收集的35个样本进行了检测，并确定了2012年以来的另外两例MOKV病例。其余33个样本均为犬源的RABV变种。

在南非，有两种RABV变种在传播，即感染犬科成员的犬科动物变种和感染獴科成员的猫鼬变种。本研究中确定的RABV序列均与同一时期的其他犬类RABV变种的序列归为一组，表明1976年开始的家犬狂犬病流行周期仍在继续。

贝叶斯分析包括所有已知的MOKV分离株，显示了一种病毒按地理来源分组的模式，而与使用的基因无关;这与之前的报告一致。南非分离株按KZN省和EC省分型。在过去28年(1970年至1998年)收集的所有KZN省分离株中，Ｎ基因的核苷酸和氨基酸水平的变异分别为2.3%和0.7%。将2012 - 2014年(最后一次从KZN省分离14年后)的新分离株与之前的KZN省分离株进行比较，Ｎ -基因的核苷酸水平和氨基酸水平的变异分别为3%和1.1%。尽管南非MOKV分离株的单系分组表明MOKV的持续存在和稳定性，但新的分离株在KZN簇群内形成了一个独特的、证据充足的分支。

这些新病例进一步证实MOKV流行已稳定建立，但由于大多数发展中国家缺乏定期狂犬病监测，而且缺乏鉴定狂犬病阳性样本的能力，所以病例报告是严重低估的。虽然大多数MOKV病例是在猫身上报告的，但其储存宿主物种的身份尚不清楚。有人提出，这个储存宿主可能是某个与猫互动的物种，但几乎没有证据支持这一观点。MOKV曾三次从鼩鼱中分离出来，一次从啮齿类动物中分离出来，再加上有限的致病性研究表明，鼩鼱和啮齿类动物的唾液中含有大量足以传播的病毒，人们不禁猜测，这些动物可能是储存宿主。

除MOKV和Ikoma 丽沙病毒外，大多数的丽沙病毒都与蝙蝠有很强的相关性。鉴于蝙蝠丽沙病毒的多样性，有人认为蝙蝠是主要的进化宿主。虽然MOKV从未从蝙蝠中分离出来，但不能排除非洲蝙蝠作为储存宿主的可能性。尽管有各种推测，但目前MOKV的储存宿主的身份仍然是未知的。人类与家猫的密切关系、未知的储存宿主以及MOKV保护性疫苗的缺乏，共同支持了对MOKV的流行病学进行更深入研究的论点。

结论

考虑到携带MOKV的家猫与人类的密切接触，以及当前基于RABV的商用疫苗缺乏针对MOKV感染的保护，强调该病毒对人兽健康都构成一定风险。这些病例的偶然发现说明目前对与狂犬病相关的丽沙病毒的监测还相当欠缺，因此，其真实发病率可能被低估，因此目前我们对MOKV的流行病学和生态学的认识还是极不完全的。

参考文献全文下载：

        New isolations of the rabies-related Mokola virus from South Africa.pdf