科研资讯 - Frontiers in Medicine

1、国内首次利用 NGS检测、比较胰腺神经内分泌肿瘤患者原发灶和转移灶配对样本的研究。

2、该研究揭示了胰腺神经内分泌肿瘤原发灶和转移灶的克隆进化过程，揭示出肿瘤不同位置间的异质性。

3、本研究使用至本元溯大panel NGS检测并通过OriTMB、OriMSI算法来辅助验证结果，并为进一步的前瞻性临床研究提供了EGFR、FRGR、NTRK3潜在的靶向治疗位点。

4、 研究成果已于近期发表在 Frontiers in Medicine 上「IF：5.091」.

乔布斯与胰腺神经内分泌肿瘤的抗争史

胰腺神经内分泌肿瘤「panNEN」是一种胰腺少见肿瘤，但由于苹果公司前总裁乔布斯罹患该病而为人所知。2003 年，乔布斯确诊为胰腺神经内分泌肿瘤，2004 年进行手术，之后又花费了 10 万美元进行基因检测。乔布斯在接受采访时曾表示：『我要么是第一批以这种方式击败癌症的人，要么是最后一批死于癌症的人。』2011 年，乔布斯因为胰腺神经内分泌肿瘤离世。

乔布斯患上的胰腺神经内分泌瘤，是源于神经内分泌系统多能干细胞的一类异质性肿瘤，占胰腺肿瘤的 3%~7% ，属于罕见病的一种。由于肿瘤生长较慢，患者的生存期相当长。这也是乔布斯能够在确诊后仍坚持八年的重要原因之一。

流行病学调查显示，胰腺神经内分泌肿瘤的发病率为 0.32/10 万，占胰腺肿瘤不到 10%。值得一提的是，胰腺神经内分泌肿瘤的发病率近年来呈稳步上升态势，据美国一项大型流行病学数据库的统计结果显示，从 1972 年到 2012 年，40 年间胰腺神经内分泌肿瘤的发病率升高了 6 倍左右。在中国，胰腺神经内分泌肿瘤更是第一高发的神经内分泌肿瘤。

中国首次利用 NGS 比较胰腺神经内分泌肿瘤原发灶和转移灶的研究

近年来的研究发现，胰腺神经内分泌肿瘤易发生远处转移，局限于胰腺的仅占 14％。发生局部转移占 22%，远处转移更高达 64%，最好发的转移部位是肝脏。多项研究表明，远处转移与胰腺神经内分泌肿瘤的总生存率低有关，但目前对于转移的潜在进化机制研究甚少，尚不清楚。

因此，如果通过 NGS 了解胰腺神经内分泌肿瘤的潜在转移机制，实现正确诊断和全面评估，对于精准诊断和提高患者生存率具有重要意义。

近期，浙江大学科研团队携手至本医疗，通过元溯大 Panel 测序，分析了 5 例胰腺神经内分泌肿瘤伴肝转移患者的肿瘤组织（原发灶与转移灶，共10例配对样本）。这是国内首次利用 NGS检测、比较胰腺神经内分泌肿瘤患者原发灶和转移灶配对样本的研究。该文章基于大panel基因检测，对原发病灶到转移病灶进化过程中肿瘤基因组的进行全面分析，研究了胰腺神经内分泌原发和转移肿瘤的克隆进化过程，揭示出肿瘤不同位置间的异质性，为进一步的前瞻性临床研究，提供了潜在的靶向治疗位点。

研究结果一 ：胰腺神经内分泌肿瘤的TMB相对较低，可能无法从免疫治疗中受益

通过计算体细胞突变来估计肿瘤突变负荷「TMB」，结果显示，与 NETs 的突变基因少于 4 个相比，NECs 的原发灶和转移灶中发现均超过 5 个。每例患者的原发灶和转移灶中大部分都是常见的突变基因「患者3除外」。此外，5例患者的 TMB 值从 1.6 到 6.4 mut/Mb 不等，所有患者均为微卫星稳定型「MSS」。该结果表明，胰腺神经内分泌肿瘤患者可能无法从免疫治疗中获益。

图 1 TMB 和突变特征

研究结果二 ： 胰腺神经内分泌肿瘤原发灶和转移灶的克隆进化过程

通过 PyClone 分析发现，患者 1 和 患者 2 中有 3 个克隆簇「图 2A、B」，在患者 3 发现1个克隆簇，在患者 4 和 5 中发现2个克隆簇「图 2C-E」。NEC的原发灶中发现 3 个克隆簇，患者 1 中有 2 个克隆种群和患者 2 仅有一个克隆种群。此外，在 G2 级 NETs 中发现的克隆簇较少，在转移灶中仅发现 1 个克隆簇。

该结果提示，在肿瘤转移过程中，不同的克隆分布不同，NET 和 NECs 的克隆进化模式也不同。

图 2 患者的 PyClone 分析

研究结果三： 原发灶和转移灶在信号通路和生物学特征存在差异

在 NETs 的转移灶中，Reactome 分析和 GO 富集分析结果均表明突变基因参与组蛋白和染色质修饰、DNA 结构变化、DNA 修复和 TP53 调节。组蛋白和染色质修饰、DNA 修复以及 TP53 和 RUNX1 的调节都参与了 NET 的原发性和转移性病变，但大多数参与的信号通路都不同。NETs原发灶中的突变基因引起的一系列表观遗传变化，为开发新的治疗方案提供了依据。

图 3 GO 富集分析 G2 NETs 中的突变基因

研究结果四：EGFR、FRGR、NTRK3 或可成为潜在靶点

GO 富集分析结果显示，在 NECs 的原发灶中的突变基因与放疗响应、细胞对肽和激素治疗响应及转录因子活性调节最相关。Reactome 分析发现 FGFR 信号、EGFR 信号和 NTRK2 信号主要参与 NEC 原发性病变，表明突变基因影响 DNA 修复、染色质修饰、SUMO 化、WNT 信号传导以及 TP53 的活性 和 RUNX1 的转录和活性调节。除对放疗响应外，NECs 中原发灶和转移灶之间几乎没有共同的信号通路。在 NEC 原发灶中，还涉及 EGFR、FGFR 和 NTRK3 通路。因此，EGFR、FGFR和NTRK3 靶向治疗可能成为 NEC 患者的新选择。然而，需要进一步临床试验来验证。

图 4 Reactome 分析 NEC 中的突变基因

总 结

通过基因测序，我们对原发病灶到转移病灶进化过程中的肿瘤基因组进行全面分析，结果表明，与其他肿瘤相比，神经内分泌肿瘤的 TMB 相对较低，可能无法从免疫治疗中受益。我们还探索了 NEC 和 NET 的原发灶与转移灶的生物学特征，揭示了 NEC 和 NET 的原发灶和转移灶中的突变异质性和克隆进化，为将来可能的靶向治疗提供了作用位点。

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