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为保证PCR结果的准确性,要预防非特异性PCR扩增和污染。常用的措施是使用UNG酶(Uracil-N-Glycosylase,尿嘧啶-N- 糖基化酶)+dUTP的防污染热启动PCR试剂盒(试剂盒以dUTP代替dTTP,所以PCR产物都是含有dU的“DNA”链)。
在PCR开始前有一步保温步骤,此时UNG酶可将反应体系中已有的U-DNA污染物中的尿嘧啶碱基降解(在非PCR条件下,比如在混PCR体系的时候产生的一些非特异扩增),消除由于污染DNA产生的扩增,同时UNG酶被灭活,不会再降解目的产物U-DNA。
dUTP不妨碍Taq合成“DNA” 双链,此时的“DNA”不是严格意义的DNA,是无法做克隆的,但是可以做荧光定量(因为可以嵌入SYBR Green)。
参考http://muchong.com/t-2702847-1-pid-8
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