基因克隆选T载体还是Topo载体？

更好的选择是Topo克隆兼入门载体

  在基因克隆实验中，T载体大家都很熟悉，目标基因可通过TA克隆连接到T载体。

  但T载体有两个明显缺点：

1. 高保真酶的扩增产物需加A才能进行TA克隆；

2. 目标基因克隆到T载体后，构建表达载体时，需要酶切回收（酶切-连接克隆），或用加接头的引物重新扩增（同源重组克隆）。

  这两个缺点限制了T载体在高通量的基因克隆和表达载体构建上的应用。

      Topo克隆载体可进行平末端连接，而且连接时间短（5 min），因此越来越多的实验室放弃T载体而使用Topo克隆载体。但目前绝大部分Topo克隆载体仍未解决目标基因从克隆载体快速转移到表达载体的问题。

  唯一例外的是Gateway克隆的Topo克隆载体，也称为Gateway入门载体，目标基因可通过LR反应从入门载体直接连接到表达载体。但Gateway入门载体高达五六千的价格使得很少实验室舍得把它当做普通的克隆载体用。

  为解决这一问题，NC Biotech（你行生物）开发了pNC-AEnTopo克隆载体兼入门载体。该载体既可作为常规的克隆、测序载体，同时也是NC克隆系统的入门载体。

  该克隆载体具有4个主要特点：

（1）平末端克隆。高保真酶的扩增产物直接连接，无需加A。

（2）反应快速、高效，操作简单。 5 min 连接反应，接近100% 连接效率，且无需冰浴、热激和 1 h 复苏。从连接到涂板只需20 min。

（3）既可作为常规的克隆载体用于基因克隆和测序，又可作为NC克隆的入门载体，通过NC克隆反应将目标基因克隆到所有NC系统表达载体，一举两得。

（4）价格便宜。作为国产Topo克隆载体兼入门载体，售价仅为Gateway入门载体的1/10。

  由于pNC-AEnTopo高效且便宜，从此入门载体可以当做普通克隆载体用，合二为一。

pNC-AEnTopo克隆载体使用便捷，从连接到涂板仅需20 min

详情请到你行生物（www.ncloning.com）的产品中心下载使用说明书

  那么问题来了，作为NC克隆的入门载体，何为NC克隆？

      NC克隆为Nimble Cloning的简称，是国产标准化分子克隆系统。所谓标准化分子克隆，是指同一个PCR产物或入门载体上的目标基因可克隆到任一系统表达载体。NC克隆类似Gateway克隆（非模仿，克隆原理完全不同），载体和目标基因均不需要酶切回收，极大减少了对各种内切酶和引物合成的需求。尤其是对于分子克隆初学者，使用NC克隆可避免载体酶切不充分、回收浓度低等问题，大幅提高实验成功率。

  目前NC克隆系统有60多个表达载体，包括原核、真菌（酵母）、植物、哺乳动物等各种系统的表达载体等，为基因功能研究提供了一个便利的平台。

  其中植物表达载体类型齐全。包括常用的各种载体框架（含T-DNA的pCambia、pGreen和pBI121框架，以及瞬时表达框架）、各种植物抗性筛选基因（潮霉素、卡那、除草剂）、各种荧光标签（GFP、CFP、RFP、mCherry）。可用于超表达、RNAi、亚细胞定位、BiFC、基因编辑、VIGS、启动子活性分析等实验。

  该套表达载体向科研人员免费开放共享。不需要花费数百甚至上千的价格购买载体了。

  如何索取表达载体？只需填写载体转移协议（MTA）即可。MTA模板以及载体序列、图谱、使用说明等资料请到你行生物（www.ncloning.com）的载体共享页面下载。

小结：pNC-AEnTopo操作简单、快速、高效、价廉，且兼具克隆载体和入门载体的功能，目标基因能从该载体直接转移到一系列免费共享的NC系统表达载体，为基因克隆和表达载体构建提供了一个高通量平台。pNC-AEnTopo是T载体和普通Topo载体的理想替代品。

最后还有两个终极拷问：

1.  NC Biotech（你行生物）我怎么没听说过？

      NC Biotech（你行生物）来自美丽富饶、生物技术蓬勃发展的海南自贸港，为新兴的研发型生物科技企业。目前产品不多，但绝不模仿，均为独家所有，突破了国内生物试剂缺乏创新、同质化严重的局面。专攻分子克隆领域，有基因克隆、载体构建、基因功能分析等方面的问题和需求找它准没错。

2.  pNC-AEnTopo克隆载体被你说得这么好，怎么获得？

  你行生物（www.ncloning.com）的联系我们页面有销售和技术支持的联系方式。转发该文到朋友圈，即刻打骨折（五折）。配文都为您准备好了——“你行生物，我看行！”，或“你行生物，真行吗？”（该款适合严谨型学者）