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免疫实验中其实本无“二抗”

已有 1783 次阅读 2019-12-18 10:10 |系统分类:科研笔记| 二抗

昨日某大学一初入免疫学实验室小师妹询抗猪IgM二抗,询到某公司,客服告诉她有小鼠抗猪IgM单抗HRP标记物,不料小师妹以为客服只想多卖产品故意欺骗她:“我要的是二抗,不是单抗!”

到底什么是一抗什么是二抗?

在百度百科,我们查到:“一抗体就是能和非抗体性抗原(特异性抗原)特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。二抗体是能和抗体结合,即抗体的抗体,其主要作用是检测抗体的存在,放大一抗的信号。”在免疫学实验中,通常我们检测某个物质(也就是抗原),需要先加入抗-抗原的抗体(primary antibody),再加入抗-Primary Antibody的抗体(Second Antibody),通常这个Second Antibody上标记一个酶或者荧光素什么,这些酶和荧光素是作为信号呈现的;因为大部分实验都是这样一个构架模式,所以这个一抗,二抗这个名字就是这么来的,这个名称也非常便于表述,但是在比较正规的文献中大家一般看不到一抗二抗的字眼,一般会这样表述:比如我们用western blot 检测GAPDH,一抗会表述为:mouse anti-GAPDH monoclonal Antibody,二抗会表述为:HRP Conjugated Goat anti-mouse Igs antibody。

再理一下:通常这个所谓的二抗的“二”,是由于它是抗-抗体的抗体,所以才称它为“二”;这个抗-抗体的抗体也可以是单抗,这个应该可以诠释那位同学的疑惑吧。

如果在上述的实验中,我们要检测的抗原是免疫球蛋白(抗体),比如,检测抗原human IgG1 Antibody ,实验构架可能是这样的:首先加入的抗体为Rabbit anti-(human IgG1 antibody),再次加入的抗体可能为HRP Conjugated Goat anti-(Rabbit Igs Antibody) antibody。

这里谁是二抗谁是一抗是不是有点晕头?其实在有些实验中不一定非要指出谁是一抗谁是二抗,只需要回忆回忆猴子捞月亮的故事,后一个抗体抓住前一个抗体的“尾巴”,最后一个抗体把酶或者荧光素连起来,让检测信号可以高信噪比呈现这就完事了。

当然,能够在免疫实验系统中一个抓另外一个“尾巴”的不仅仅是抗体,准确的说应该叫Binding Reagent,这里面大名鼎鼎的就是生物素系统-链霉亲和素系统,这个很多时候比二抗还好用,但是必须首先对一抗进行生物素标记。

更多内容大家可以补充



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