RAW264.7细胞的培养方法

1. 细胞培养

RAW264.7细胞在含10％的新生小牛血清及100 U/mL青霉素、链霉素的DMEM高糖培养液中进行培养，培养箱培养条件设定为5％CO₂，37℃，隔天换液，每日观察细胞的生长状况。

2. 细胞传代

待RAW264.7细胞生长至70～80％融合度时，弃去旧的细胞培养液，并用PBS洗涤细胞2次，加入0.25%的胰蛋白酶，于倒置显微镜下观察细胞形态变化，当细胞出现胞质回缩，胞体变圆，细胞间隙变大时，弃去消化液，立即加入含10%血清的细胞培养液终止消化，用吸管吸取培养液，反复轻柔吹打贴壁的细胞使之脱落并悬浮，调整细胞至合适密度后接种于新的培养皿中，置于5％CO₂，37℃培养箱中培养。

3. 细胞冻存

将取于对数生长期且生长状态良好的RAW264.7细胞用0.25%的胰蛋白酶消化后，制成单细胞悬液并收集于15 mL离心管，1 000 r/min，离心5 min，然后弃去上清液，用冻存液（以血清和DMSO按9:1的比例混合，现配现用）混悬沉淀细胞，并调整细胞浓度至（1~10）×10⁶/mL，将细胞悬液分装入冻存管内（1 mL/管），旋紧管盖，封口，标记细胞名称和冻存日期，按4℃ 30 min， -20℃ 2 h，-80℃ 过夜顺序降温后，最后放置于液氮罐中长期保存。

4. 细胞复苏

从液氮罐中取出需要复苏的RAW264.7细胞冻存管，将冻存管放入一次性的PE手套中，迅速投入到已预热至37℃的水浴锅中，并不断摇动直至冻存液完全融化，将细胞悬液移入离心管，1 000 r/min，离心5 min，弃上清，加入含10%血清的新鲜细胞培养液制成细胞悬液，调整细胞至合适密度后接种于新的培养皿中，置于5％CO₂，37℃培养箱中培养。