YYJJWW的个人博客分享 http://blog.sciencenet.cn/u/YYJJWW 回首向来萧瑟处,归去,也无风雨也无晴。

博文

[转载]PCR产物扩增出现特异性差(引物二聚体严重、杂带)等情况,如何改进?

已有 16006 次阅读 2022-4-19 15:56 |系统分类:科研笔记|文章来源:转载

1 选择热启动酶

使用热启动酶可以减少在反应准备阶段发生的非特异扩增,同时PCR反应体系需要在冰上进行配制,有助于得到高特异性的扩增结果。

2 优化反应体系与条件

适当提高退火温度、减少循环数、适当降低Mg离子工作浓度,根据具体的实验要求优化条件。还可以尝试某些特殊的程序,如巢式PCRTouchdown PCR等。

3 优化模板量

适当减少模板量,过量的模板也会导致非特异扩增,模板使用量请参考说明书。

4 优化引物

才适当延长引物,可提高引物与模板的结合效率,提高特异性;引物加入量过高也会导致非特异性扩增,引物使用量请参考说明书。

 

注:纯化PCR产物,PCR产物需要进行后续实验时,如果确定有目的条带扩增,可以凝胶回收目的条带。




https://blog.sciencenet.cn/blog-3375649-1334642.html

上一篇:[转载]什么是巢式PCR和Touchdown PCR?
下一篇:利用天地图及QGIS软件制作水系图
收藏 IP: 42.94.201.*| 热度|

0

该博文允许注册用户评论 请点击登录 评论 (0 个评论)

数据加载中...

Archiver|手机版|科学网 ( 京ICP备07017567号-12 )

GMT+8, 2024-11-24 22:04

Powered by ScienceNet.cn

Copyright © 2007- 中国科学报社

返回顶部