双荧光共定位系统检测活细胞内蛋白质相互作用
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2011-3-18 15:47
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生物学, 蛋白质, 图片, 相互作用, 基础医学
荧光蛋白是目前细胞分子生物学广泛应用的分子探针,在细胞生物学、组织工程、基础医学领域也有广泛应用。荧光蛋白以其可以在活细胞正常生理水平下即时反应细胞、生物大分子和蛋白质相互作用的特点大大推进了活细胞内的分子探针技术的发展。例如,从发光水母Aquoria victoria中分离的绿色荧光蛋白(GFP)和来源于珊瑚Discosoma sp的红色荧光蛋白(DsRed,RFP)是两种广泛使用的荧光蛋白。
蛋白质相互作用是分子细胞生物学中的重要研究领域,也是生物功能得以实现的分子基础之一。凭借快捷灵敏,即时检测和无需破坏活细胞的特点,荧光蛋白在此领域也受到热捧。
本期第22~26页发表了周军等的论文“一种检测蛋白质相互作用的双荧光共定位系统”,以GFP和RFP为材料,通过合理设计,将特异的细胞定位信号插入到对应的荧光蛋白。然后结合常规的细胞转染技术,开发出一种新的用于活细胞内检测蛋白质相互作用的检测系统。封面图片即为该共定位系统原理示意图。该系统通过基因工程的方法将RFP和GFP的N末端和C末端插入特异的定位信号,使得两种荧光蛋白单独表达(或连接无相互作用的蛋白对)时,在细胞内的空间位置上分离。当待测蛋白A和B无直接相互作用时,它们在细胞内不会结合或者相互接近,检测系统的绿色荧光和红色荧光将会分别在细胞的核外和核内表达;当待测蛋白A和蛋白B具有直接的相互作用时,它们在细胞内会相互结合或者相互接近,两种荧光在核内会产生共定位的现象。文中采用经典的抗凋亡蛋白Bcl-2和Bak-BH3短肽作为蛋白对测试系统,共定位现象明显,系统灵敏可靠。
该项成果突破国外同类技术的专利保护,为国内细胞分子生物学和蛋白质相互作用的研究领域开发出更加灵敏实用的检测工具。
封面图片由周军提供。本期封面由金功博设计。(责任编辑 吴晓丽)
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